玉米糁大肠杆菌O157检测

检测项目

样品制备：样品均质和稀释处理。参数包括稀释比例1:10，均质时间2分钟，使用无菌生理盐水作为稀释液。

增菌培养：在选择性培养基中进行初步培养。参数包括培养基类型EC肉汤，培养温度37摄氏度，培养时间24小时，摇床转速150 rpm。

分离培养：在选择性琼脂平板上进行划线分离。参数包括培养基类型SMAC琼脂，培养条件37摄氏度，时间24小时，观察典型菌落形态。

生化鉴定：进行系列生化反应测试。参数包括IMViC试验（吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐利用），糖发酵试验如乳糖、山梨醇。

血清学鉴定：使用特异性抗血清进行凝集试验。参数包括O157抗血清，凝集反应时间30分钟，温度25摄氏度。

PCR检测：分子生物学方法检测特定基因。参数包括引物针对stx1、stx2、eae基因，循环条件94摄氏度变性30秒，55摄氏度退火30秒，72摄氏度延伸1分钟，循环数35。

毒素检测：检测志贺毒素存在。参数包括细胞毒性试验使用Vero细胞，或ELISA方法检测毒素浓度，灵敏度0.1 ng/mL。

计数方法：定量评估菌落数量。参数包括平板计数法检测限10 CFU/g，或MPN法使用3管系列，置信区间95%。

质量控制：包括内部质量控制措施。参数阳性对照菌株E. coli O157:H7 ATCC 43888，阴性对照非O157 E. coli，重复测试次数3。

结果确认：最终阳性结果验证。参数包括生化确认如尿素酶试验阴性，血清学确认如H7抗血清凝集。

环境监测：检测生产环境样品。参数包括空气沉降法采样，采样时间30分钟，培养基类型PCA琼脂。

残留检测：评估消毒剂残留影响。参数包括中和剂使用如硫代硫酸钠，残留浓度检测限0.1 ppm。

检测范围

玉米糁原料：未加工的玉米糁颗粒或粉末。

加工玉米糁产品：如即食玉米粥、玉米面包等食品。

饲料原料：用于动物饲料的玉米糁成分。

食品添加剂：基于玉米糁的防腐剂或填充剂。

生物发酵产品：玉米糁作为基质的发酵制品。

环境监测样品：生产车间空气、表面擦拭样品。

水样：加工用水或清洗水样品。

土壤样品：农田或原料储存区域的土壤。

食品包装材料：与玉米糁接触的包装物。

农产品样品：玉米作物及相关农产品。

工业用玉米糁：非食品工业应用中的玉米糁。

临床相关样品：如有疫情关联的临床标本。

检测标准

ISO 16654:2001 食品和动物饲料微生物学 大肠杆菌O157检测水平方法。

GB 4789.36-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7检验。

ASTM F2750-09 标准指南 for Detection of Escherichia coli O157:H7 in Food.

GB/T 14926.47-2008 实验动物 微生物学检验 第47部分：大肠埃希氏菌O157检测。

ISO 7218:2007 食品和动物饲料微生物学 一般要求和指南。

GB 4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验，参考相关部分。

ISO 6579-1:2017 微生物学 食物链中沙门氏菌检测的横向方法，适用于类似流程。

检测仪器

微生物培养箱：提供恒定温度环境，用于样品培养和菌株生长，温度范围20-60摄氏度，精度±0.5摄氏度。

PCR仪：用于DNA扩增和分子检测，支持热循环程序，温度控制精度±0.1摄氏度，最大样品容量96孔。

离心机：分离样品中的细胞和液体，转速范围1000-15000 rpm，容量50 mL×6，用于沉淀收集。

显微镜：观察微生物形态和染色结果，放大倍数40-1000倍，配备油镜和光源。

酶标仪：测量光学密度用于ELISA检测，波长范围400-700 nm，读取模式单色或双色。

生物安全柜：提供无菌操作环境，气流速度0.3-0.5 m/s，HEPA过滤效率99.99%。

自动菌落计数器：自动计数琼脂平板菌落，图像分辨率5 MP，计数精度±5%。