支原体污染快速检测

检测项目

PCR检测：基于聚合酶链反应技术，检测支原体特异性DNA序列；具体检测参数包括灵敏度10 copies/μL，扩增循环数35-40，产物大小100-500 bp。

ELISA检测：酶联免疫吸附 assay，检测支原体抗原或抗体；具体检测参数包括检测限0.1 ng/mL，孵育时间60分钟，波长450 nm读数。

培养法：传统微生物培养方法，观察支原体生长；具体检测参数包括培养基类型Hayflick's medium，培养时间7-14天，温度37°C。

荧光染色检测：使用荧光染料如Hoechst 33342染色支原体DNA；具体检测参数包括染色时间15分钟，显微镜放大倍数400x，荧光强度定量。

DNA杂交检测：核酸杂交技术检测支原体特异性基因；具体检测参数包括探针长度20-30 bp，杂交温度42°C，信号检测灵敏度1 pg/μL。

实时荧光PCR检测：定量检测支原体DNA拷贝数；具体检测参数包括Ct值计算，荧光染料SYBR Green，动态范围10^2-10^8 copies/μL。

免疫荧光检测：荧光标记抗体检测支原体表面抗原；具体检测参数包括抗体稀释比1:100， incubation时间30分钟，显微镜观察。

电镜检测：电子显微镜观察支原体超微结构；具体检测参数包括分辨率0.1 nm，样本制备时间2小时，放大倍数10000x。

生物发光检测：基于ATP生物发光法检测支原体代谢活性；具体检测参数包括ATP提取效率95%，发光值读数RLU，检测限0.01 nM ATP。

质谱分析检测：质谱技术检测支原体特异性蛋白或代谢物；具体检测参数包括质量精度5 ppm，扫描范围m/z 50-2000， retention time 10分钟。

检测范围

细胞培养物：包括哺乳动物细胞系、干细胞培养液等生物样本。

生物制药产品：疫苗、单克隆抗体、重组蛋白等制药中间体。

医疗器械：植入物、导管、手术器械等医疗用品。

组织工程产品：人工皮肤、骨支架等再生医学材料。

食品样品：乳制品、肉类等易污染食品基质。

环境样品：空气过滤器、水样等环境监测样本。

临床样本：血液、尿液、组织活检等患者来源材料。

化妆品：护肤品、化妆品原料等个人护理产品。

农业产品：种子、饲料、农产品加工品。

科研材料：实验室试剂、培养基、生物试剂等。

检测标准

ISO 11737-1医疗器械灭菌微生物方法第1部分产品上微生物种群测定。

GB/T 14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分生物试验方法。

ASTM E2315-03使用时间-杀灭程序评估抗菌活性的标准指南。

ISO 17025检测和校准实验室能力的通用要求。

GB 15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准。

EP 2.6.7欧洲药典支原体检测方法。

USP 63美国药典微生物检测章节。

ISO 22119分子体外诊断检测传染病检测要求。

GB/T 37844-2019细胞培养支原体检测方法。

ASTM F3127-15医疗器械微生物检测标准指南。

检测仪器

PCR仪：用于核酸扩增反应，在本检测中执行支原体DNA的扩增和检测。

酶标仪：用于光密度读数，在本检测中支持ELISA板的吸光度测量。

荧光显微镜：用于荧光信号观察，在本检测中实现支原体染色样本的形态学分析。

离心机：用于样本分离，在本检测中完成细胞碎片和杂质的去除。

核酸提取仪：用于自动化核酸纯化，在本检测中提取支原体DNA用于下游分析。

恒温培养箱：用于微生物培养，在本检测中维持支原体生长所需温度条件。

电泳仪：用于核酸分离，在本检测中分析PCR产物大小和纯度。

质谱仪：用于分子量测定，在本检测中鉴定支原体特异性生物标志物。

生物发光检测仪：用于ATP测量，在本检测中量化支原体代谢活性。

杂交炉：用于核酸杂交，在本检测中完成DNA探针与靶序列的结合。