蛋白印迹检测

检测项目

蛋白质分离：通过SDS-PAGE电泳分离蛋白质混合物，检测参数包括凝胶浓度8-12%、电压100-200V、运行时间60-120分钟。

转膜效率评估：将蛋白质从凝胶转移到固相膜上，检测参数有转膜电流200-400mA、时间60-90分钟、缓冲液pH 8.3。

抗体结合特异性：使用一抗和二抗检测目标蛋白，检测参数包括抗体稀释比例1:1000-1:5000、孵育温度4-25℃、时间1-2小时。

信号检测灵敏度：通过化学发光或荧光方法检测蛋白信号，检测参数有曝光时间1-10分钟、检测限0.1-1ng蛋白。

蛋白质定量分析：基于标准曲线进行目标蛋白定量，检测参数包括线性范围0.5-50μg、相关系数R²>0.99。

背景噪声控制：优化洗涤步骤减少非特异性结合，检测参数有洗涤缓冲液Tween-20浓度0.05-0.1%、洗涤次数3-5次。

重现性评估：通过重复实验评估检测一致性，检测参数包括变异系数CV<10%、样本数n=3。

膜类型性能：比较硝酸纤维素膜和PVDF膜的结合效率，检测参数有孔径0.2-0.45μm、蛋白结合能力100-200μg/cm²。

缓冲液优化：调整孵育和洗涤缓冲液组成，检测参数包括pH值7.4-8.0、离子强度150mM NaCl。

数据分析准确性：使用图像分析软件量化蛋白条带，检测参数有积分密度测量、背景扣除阈值50-100像素。

检测范围

细胞裂解物：用于分析培养细胞中特定蛋白的表达水平。

组织提取物：检测动物或人体组织样本中的疾病标志物。

血清样本：应用于临床检测中的自身抗体或感染标志物。

重组蛋白：验证基因工程表达蛋白的纯度和活性。

病毒蛋白：研究病毒结构蛋白在感染过程中的作用。

植物提取物：分析植物生理代谢相关蛋白的表达。

食品样品：检测食品中过敏原蛋白或转基因成分。

环境样本：监测水或土壤中微生物蛋白污染物。

药物开发：评估 Pharmaceuticals 对细胞蛋白表达的影响。

临床诊断：用于自身免疫疾病或癌症的蛋白标志物检测。

检测标准

ISO 15189 医学实验室质量和能力要求。

GB/T 19634-2005 检测和校准实验室能力通用要求。

ASTM E2520 分子生物学检测方法评估指南。

GB/T 37871-2019 生物样品中蛋白质检测方法。

ISO 13485 医疗器械质量管理体系。

检测仪器

电泳仪：提供电场进行蛋白质分离，功能是执行SDS-PAGE电泳。

转膜装置：实现蛋白质从凝胶到膜的转移，功能是应用电泳或毛细作用转膜。

成像系统：捕获化学发光或荧光信号，功能是检测和记录蛋白条带图像。

微量分光光度计：测量蛋白质样品浓度，功能是定量分析前处理样品。

摇床：用于抗体孵育过程中的均匀混合，功能是提供恒定振荡。