植物抗病性分子测试

检测项目

抗病基因表达量测定：通过qRT-PCR技术检测PR1、NPR1等关键基因转录水平，检测范围0.001-1000 ng/μL cDNA，灵敏度达5 copies/μL。

病程相关蛋白活性分析：定量β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶等防御酶活性，采用分光光度法，检测限0.01 U/mg prot，线性范围0.05-10 U/mL。

水杨酸信号通路检测：测定SA、JA激素浓度及NPR1蛋白磷酸化状态，HPLC-MS/MS法定量，精度±0.1 ng/g FW，动态范围0.5-500 ppb。

抗病小分子代谢物筛查：靶向检测植保素、黄酮类等次生代谢物，UPLC-QTOF分析，分辨率30000 FWHM，质量精度<2 ppm。

病原效应蛋白互作验证：酵母双杂交系统检测R-Avr蛋白结合强度，报告基因定量范围0-500 mOD，结合常数Kd测量误差≤5%。

抗病相关miRNA鉴定：高通量测序分析miR393、miR828等表达丰度，读长2×150 bp，检出限0.01 RPM。

表观遗传修饰检测：ChIP-qPCR分析抗病基因启动子区H3K4me3修饰水平，抗体特异性≥90%，富集倍数检测范围1-1000×。

细胞过敏性反应监测：台盼蓝染色定量细胞死亡率，图像分析精度±0.5%，检测范围0.1-99%坏死面积。

活性氧爆发动力学：化学发光法测定H₂O₂峰值浓度，时间分辨率0.1 s，线性响应1 nM-1 mM。

系统获得抗性诱导评估：远端叶片病原接种后防御基因表达追踪，空间定位精度±0.5 mm²。

检测范围

粮食作物抗病种质资源：水稻抗稻瘟病基因Pi-ta、小麦抗锈病基因Lr34等分子标记辅助筛选。

经济作物转基因品系：转Bt基因棉花黄萎病抗性、CPR5突变体番茄晚疫病抗性验证。

林木抗逆性育种材料：杨树溃疡病RGA基因家族多态性分析，松材线虫NBS-LRR基因表达谱。

药用植物免疫诱导剂：人参皂苷Rb1对黄芪根腐病的系统抗性激活效应检测。

蔬菜嫁接砧木筛选：南瓜砧木对黄瓜枯萎病抗性的SA信号通路调控机制研究。

病原物无毒基因鉴定：稻瘟病菌Avr-Pik等效应蛋白与宿主互作模式解析。

生物农药作用机理：枯草芽孢杆菌脂肽诱导烟草TMV抗性的PR蛋白表达动态监测。

抗病肥料效能评估：硅肥增强水稻抗白叶枯病的胼胝质沉积定量分析。

组培苗病原潜伏检测：马铃薯试管苗PVY病毒CP基因表达量阈值判定。

种子处理技术验证：壳聚糖包衣激活玉米丝黑穗病抗性的MAPK磷酸化水平检测。

检测标准

ISO 21427-1:2020 植物基因表达定量分析技术规范

GB/T 38581-2020 植物抗病性分子检测通用要求

ISO 20688:2018 植物病原互作蛋白质组学分析指南

GB/T 40456-2021 农作物抗病虫基因检测规程

ASTM F3138-15 植物防御应答酶活性测定标准方法

ISO 21710:2020 植物激素质谱检测方法验证规范

GB/T 39997-2021 植物小RNA高通量测序技术导则

ISO 23930:2020 植物-微生物互作酵母系统检测通则

GB/T 40737-2021 作物抗病性表观遗传分析指南

ASTM E2977-15 植物活性氧爆发检测标准规程

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：配置384孔模块，执行抗病基因绝对定量，温度均一性±0.2℃，支持HRM分析。

超高分辨质谱仪：Orbitrap Fusion Lumos系统，实现抗病代谢物非靶向筛查，质量精度<1 ppm。

激光共聚焦显微镜：配备FRET模块，观测病原侵染过程中钙离子荧光信号时空动态，分辨率120 nm。

高通量核酸蛋白互作仪：Octet RED96生物分子作用力分析系统，实时监测R-Avr蛋白结合动力学，数据采集率5 Hz。

多功能酶标仪：Synergy H1杂交检测平台，同步完成ROS化学发光、防御酶底物显色等8种检测模式。

全自动蛋白质互作系统：NanoTemper Mo.2蛋白稳定性分析仪，通过DSF技术测定抗病蛋白热迁移曲线，温度梯度0.1℃/s。

表观基因组分析平台：Covaris M220超声破碎仪联合S220聚焦超声仪，实现抗病基因启动子区染色质片段化。