咨询热线: 400-635-0567

细胞周期检测

细胞周期检测

细胞周期检测去哪做?不同的捕获微球上包被有特异的捕获抗体,并具有不同的荧光强度。通过流式细胞仪进行荧光检测。对样品中的各检测因子的含量进行分析。中析研究所检测中心为您提供优质可靠的分析检测服务,出具原始数据的检测报告,全国支持扫码查询真伪。
.

细胞周期检测:技术原理与应用解析

简介

细胞周期是细胞从一次分裂完成到下一次分裂结束所经历的全过程,分为G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期(DNA合成后期)和M期(分裂期)四个阶段。细胞周期的调控异常与肿瘤发生、组织再生障碍、免疫系统疾病等密切相关。因此,细胞周期检测在基础研究、药物开发及临床诊断中具有重要意义。通过检测细胞周期分布,可评估细胞增殖状态、分析药物对细胞周期的影响,并为疾病机制研究提供数据支持。

适用范围

细胞周期检测技术广泛应用于以下领域:

  1. 肿瘤学研究:评估癌细胞增殖活性,分析放化疗药物对肿瘤细胞周期阻滞的作用。
  2. 药物研发:筛选调控细胞周期的候选化合物,验证药物对特定周期阶段的靶向性。
  3. 免疫学与再生医学:研究免疫细胞活化机制,评估干细胞分化过程中的周期变化。
  4. 临床诊断:辅助判断白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的恶性程度及预后。

检测项目及简介

  1. 细胞周期分布分析 通过测定细胞群中处于G1、S、G2/M期的细胞比例,反映细胞增殖状态。例如,肿瘤组织常表现为S期细胞比例升高。
  2. DNA含量检测 利用荧光染料(如碘化丙啶PI)标记DNA,通过流式细胞术量化细胞DNA含量,间接判断细胞所处周期阶段。
  3. 周期调控蛋白检测 检测Cyclin(周期蛋白)、CDK(周期蛋白依赖性激酶)及p21、p53等调控因子的表达水平,揭示周期调控机制。
  4. 细胞增殖标志物分析 例如Ki-67蛋白的表达与细胞增殖活性呈正相关,常用于评估肿瘤恶性程度。

检测参考标准

  1. ISO 10993-5:2009 《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》中规定了细胞增殖与周期分析的实验设计原则。
  2. GB/T 39730-2020 《流式细胞术检测细胞周期技术规范》明确了流式细胞术在细胞周期检测中的操作流程与质量控制要求。
  3. CLSI H42-A2 《流式细胞术在DNA分析中的应用指南》提供了DNA含量检测的标准化方法。

检测方法及相关仪器

1. 流式细胞术(Flow Cytometry) 原理:将单细胞悬液经荧光染料标记后,通过流式细胞仪检测细胞DNA含量,结合软件分析周期分布。 步骤

  • 样本制备:细胞固定后用RNA酶处理,碘化丙啶(PI)染色。
  • 仪器检测:采用488 nm激发光,收集红色荧光信号(波长>630 nm)。
  • 数据分析:ModFit等软件拟合G1、S、G2/M峰面积。 仪器:BD FACSCalibur、Beckman Coulter CytoFLEX。

2. 免疫荧光染色法 原理:通过特异性抗体标记Cyclin B1、pH3(磷酸化组蛋白H3)等周期相关蛋白,结合荧光显微镜或高内涵成像系统分析。 步骤

  • 细胞固定与透膜处理。
  • 一抗孵育后,标记荧光二抗(如FITC、Cy3)。
  • 成像分析:计算不同周期阶段的细胞比例。 仪器:Olympus IX83荧光显微镜、PerkinElmer Operetta CLS高内涵系统。

3. EdU标记法 原理:利用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)掺入新合成DNA,通过点击化学反应实现S期细胞特异性标记。 步骤

  • 细胞与EdU共孵育后固定。
  • 使用含荧光染料的反应液标记EdU。
  • 流式细胞术或显微镜检测S期细胞比例。 优势:相比传统BrdU法,无需DNA变性处理,兼容性更佳。

4. 实时细胞分析(RTCA) 原理:通过微电极阵列实时监测细胞贴壁阻抗变化,间接反映细胞增殖与周期进程。 仪器:ACEA xCELLigence RTCA系统。

技术难点与优化策略

  1. 样本制备:细胞固定过度可能导致DNA碎片干扰检测,需优化乙醇浓度(推荐70%)和固定时间(≤24小时)。
  2. 细胞聚集:单细胞悬液制备不佳会降低分辨率,可通过40 μm滤网过滤或增加胰酶消化时间。
  3. 数据分析:凋亡细胞亚G1峰会干扰G1期判定,建议联合Annexin V/PI双染法排除干扰。

发展趋势

随着单细胞测序技术的进步,空间转录组学与细胞周期分析相结合,可揭示肿瘤微环境中细胞周期异质性。此外,AI辅助图像分析系统(如DeepCycle)显著提升了检测通量与准确性。

结语

细胞周期检测作为细胞生物学研究的核心手段,其技术革新持续推动着疾病机制解析和精准医疗发展。从传统流式细胞术到智能化成像平台,多维度的检测方法为科研与临床提供了更全面的数据支撑。未来,多组学整合与自动化技术的融合将进一步拓展其应用边界。

检测标准

GB/T 38506-2020 动物细胞培养过程中生化参数的测定方法

GB/T 34777-2017 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达产品残留DNA检测 荧光定量PCR法

GB/T 33249-2016 纳米技术 活细胞内金纳米棒含量测定 消光光谱法

GB/T 30737-2014 海洋微微型光合浮游生物的测定 流式细胞测定法

GB/T 28646-2012 化学品.体外哺乳动物细胞微核试验方法

<

检测优势

优质的技术团队,中析研究所自成立以来,一直注重与多个国内外科研团队进行技术交流,始终保持技术层面的优势,

机构的资质保障,中析研究所是一家隶属与集体所有制的综合性科研单位,并取得了CMA等多种资质的认证,取得了国家高新技术企业认证。

服务范围覆盖广,中析研究所在多个科研领域都设有专项实验室,每个实验室都配备了大量的先进仪器设备和一批高素质的科研检测人员,以更好的完成客户的检测项目。

检测项目齐全,涵盖性能测试、成分分析、理