流式细胞术验证检测

检测项目

流式细胞术验证检测主要包含以下核心项目：免疫表型分析通过CD分子标记实现淋巴细胞亚群分类及活化状态评估；细胞周期检测采用PI或Brdu染色量化G0/G1/S/G2-M期分布；凋亡检测联合Annexin V/PI双染区分早期与晚期凋亡细胞；细胞内因子检测需经固定破膜处理测定IL-2、IFN-γ等分泌水平；干细胞鉴定基于CD34/CD133等特异性标志物结合侧向群分析（SP）。功能性检测包括钙流测定、活性氧（ROS）检测及线粒体膜电位评估。

检测范围

本技术适用于外周血/骨髓单核细胞（PBMC/BMMC）、贴壁/悬浮培养细胞系、组织解离细胞悬液及外泌体表面标志物分析。临床领域涵盖白血病免疫分型（如CD45/CD34/CD19组合）、HIV患者CD4+ T细胞绝对计数、移植后嵌合体监测等诊断应用。科研方向涉及Th1/Th2/Th17细胞分化研究、肿瘤干细胞富集鉴定及CAR-T治疗效价评估。特殊样本需执行红细胞裂解（全血）、密度梯度离心（体液）或机械/酶消化（实体组织）前处理。

检测方法

标准操作流程包含样本活性检测（台盼蓝拒染率＞95%）、Fc受体封闭（人源样本使用IgG阻断剂）、多色抗体Panel优化（遵循光谱重叠最小化原则）。补偿对照设置需采集单阳管调节PMT电压，采用FMO（Fluorescence Minus One）对照界定阳性阈值。数据分析采用FlowJo v10.8软件进行双指数转换补偿校正，设门策略需记录淋巴细胞-PBMNC-FSC/SSC-Area/Height双参数去粘连体步骤。

检测仪器

主流设备配置3激光13色系统（如BD LSRFortessa™ 488/561/640nm），配备96孔板自动进样模块保障高通量检测。关键性能验证包含CV值测定（标准微球各通道CV＜3%）、灵敏度测试（FITC＜100 MESF）及液流稳定性校准（核心压力维持±0.1psi）。每月执行激光功率校准（氩离子激光488nm功率≥15mW）、光电倍增管线性度验证（Logicle显示模式下4-log动态范围覆盖）。每日开机需执行CS&T质控微球校准并记录FSC/SSC分辨率参数。

检测流程

确定测试对象与安排：确认测试对象并进行初步检查，确定样品寄送或上门采样安排；

制定验证实验方案：与委托方确认与协商实验方案，验证实验方案的可行性和有效性；

签署委托书：签署委托书，明确测试详情，确定费用，并按约定支付；

进行实验测试：按实验方案进行试验测试，记录数据，并进行必要的控制和调整；

数据分析与报告：分析试验数据，并进行归纳，撰写并审核测试报告，出具符合要求的测试报告，并及时反馈测试结果给委托方。