大肠杆菌O157:H7分离鉴定检测

检测项目

样品前处理：均质化和稀释样品准备检测。具体检测参数：均质化时间30秒至5分钟，稀释因子1:10至1:1000，温度控制4C。

分离培养：使用选择性培养基分离目标细菌。具体检测参数：培养基类型山梨醇麦康凯琼脂或ChromIDO157，培养温度37C，培养时间18-24小时。

生化鉴定：通过生化特性区分菌株。具体检测参数：糖发酵测试葡萄糖阳性、乳糖阴性，吲哚试验阳性，动力试验阳性。

血清学分型：鉴定O157和H7抗原特异性。具体检测参数：抗O157抗体凝集试验，抗H7鞭毛抗体测试，凝集强度分级1+至4+。

PCR检测：分子水平确认病原体。具体检测参数：引物序列基于rfbE和fliC基因，扩增循环35-40cycles，退火温度55-60C。

毒素检测：定量志贺毒素水平。具体检测参数：酶联免疫吸附法检测Stx1和Stx2，灵敏度0.1ng/ml，读数范围450nm波长。

抗生素敏感性测试：评估耐药性模式。具体检测参数：抗生素盘包括氨苄西林、链霉素、四环素，抑菌圈直径测量单位为毫米。

菌落计数：量化样品中细菌浓度。具体检测参数：平板计数法，稀释系列10倍梯度，计数范围10-1000CFU/ml。

形态学观察：显微镜检查细菌特征。具体检测参数：革兰染色阴性反应，杆菌形态长度1-2微米，宽度0.5微米。

快速筛查方法：免疫层析法初步检测。具体检测参数：检测时间15分钟，特异性95%，灵敏度检测限10^3CFU/g。

分子亚型分型：区分菌株变异。具体检测参数：脉冲场凝胶电泳参数电压6V/cm，脉冲时间5-50秒，缓冲液温度14C。

环境耐受性测试：评估生存条件。具体检测参数：pH耐受范围3.5-9.0，温度耐受范围4-45C，盐浓度耐受0-8%。

检测范围

生鲜肉制品：牛肉、猪肉等原料肉检测。

乳制品：生牛奶、黄油和奶酪产品检测。

蔬菜水果：绿叶蔬菜、苹果汁和沙拉制品检测。

饮用水：瓶装水、水源和公共供水系统检测。

加工食品：汉堡、火腿和熟食产品检测。

动物饲料：饲料原料和添加剂检测。

环境样本：土壤、水源和废水样品检测。

临床样本：人类粪便、尿液和血液样本检测。

食品接触表面：餐具、加工设备和包装材料检测。

生物制品：疫苗原料和细胞培养物检测。

化妆品：原料和成品防腐剂检测。

药品：口服制剂和注射剂原料检测。

检测标准

ISO16654:2001Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—HorizontalmethodforthedetectionofEscherichiacoliO157

GB/T4789.6-2003食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7检验

FDABAMChapter4a:DiarrheagenicEscherichiacoli

ENISO16654:2017Microbiologyofthefoodchain—HorizontalmethodforthedetectionofEscherichiacoliO157

AOACOfficialMethod996.09EscherichiacoliO157:H7inFoods

GB4789.36-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7检验

ASTMF1356JianCeTestMethodforDetectionofEscherichiacoliO157:H7inFood

ISO/TS13136:2012Microbiologyoffoodandanimalfeed—Real-timepolymerasechainreaction-basedmethodforthedetectionoffood-bornepathogens

GB/T34224-2017生物产品中大肠杆菌O157:H7检测方法

检测仪器

平板计数器：用于自动计数细菌菌落。在本检测中测量样品中大肠杆菌O157:H7浓度，支持稀释因子计算和CFU统计。

PCR扩增仪：执行分子扩增反应。在本检测中用于基因序列扩增，温度控制范围4-99C，时间精度0.1秒。

光学显微镜：观察细菌形态特征。在本检测中进行革兰染色分析，放大倍数1000倍，分辨率0.2微米。

酶标仪：定量分析毒素或抗原水平。在本检测中测量ELISA吸光度值，波长范围400-700nm，灵敏度0.001OD。

恒温培养箱：维持恒定温度培养样品。在本检测中用于细菌分离培养，温度控制精度0.5C，容量100升。

离心机：分离样品成分。在本检测中处理样品沉淀，转速范围1000-15000rpm，时间设置1-30分钟。

移液器：精确添加液体试剂。在本检测中确保试剂体积准确，精确度0.1微升，量程范围0.1-1000微升。