提取物对耐药菌株敏感性检测

检测项目

最小抑菌浓度（MIC）：测定提取物抑制耐药菌株生长的最低浓度，检测范围0.125~512μg/mL，采用微量肉汤稀释法，结果以μg/mL表示。

最小杀菌浓度（MBC）：评估提取物杀灭耐药菌株的最低浓度，以MIC值的4~8倍为判断标准，重复3次验证，结果取平均值。

抑菌圈直径：通过Kirby-Bauer纸片扩散法测量提取物对耐药菌株的抑制圈大小，直径测量精度±0.5mm，结果以mm表示。

时间-杀菌曲线：记录不同时间点提取物对耐药菌株的杀菌率，时间间隔1~24小时，活菌计数误差±10%，曲线斜率反映杀菌速度。

联合药敏试验：测定提取物与常用抗菌药物联合使用的协同、相加或拮抗作用，采用棋盘稀释法，FIC指数≤0.5为协同，0.5~1为相加，1~2为无关，>2为拮抗。

耐药突变选择窗（MSW）：确定提取物抑制耐药突变株选择的浓度范围，检测范围为MIC~MBC之间的浓度区间，MSW越窄越不易诱导耐药。

生物膜抑制率：评估提取物对耐药菌株生物膜形成的抑制作用，采用结晶紫染色法，吸光度测量范围0~2.5A，抑制率=（空白组吸光度-试验组吸光度）/空白组吸光度×100%。

胞内菌清除率：测定提取物对细胞内耐药菌株的清除效果，感染复数（MOI）为10:1，流式细胞术检测阳性率，清除率=（感染组阳性率-治疗组阳性率）/感染组阳性率×100%。

耐药基因表达水平：采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测耐药基因（如blaCTX-M、mecA）的相对表达量，扩增效率90%~110%，结果以2^(-ΔΔCt)表示。

体外动态杀菌试验：模拟体内药物浓度变化，连续监测72小时内耐药菌株的生长情况，采样间隔2小时，采用浊度法或平板计数法记录结果。

抗菌后效应（PAE）：测定提取物作用后耐药菌株恢复生长的延迟时间，药物作用时间1~2小时，PAE=试验组生长延迟时间-对照组生长延迟时间，结果以小时表示。

检测范围

天然植物提取物：包括黄酮类、生物碱类、萜类、酚类等天然产物，来自草本、木本植物的根、茎、叶、花、果等部位，评估其对耐药菌的抑制活性。

微生物代谢产物：如放线菌、真菌、细菌发酵产生的抗菌物质，包括抗生素、抗菌肽、脂肽类化合物，检测其对耐药菌株的敏感性。

海洋生物提取物：海洋藻类（如海带、螺旋藻）、贝类（如牡蛎、贻贝）、鱼类（如鳕鱼、三文鱼）等提取物，分析其对耐药菌的作用效果。

中药复方提取物：中药饮片配伍后的提取物，如清热解毒类、抗菌消炎类复方，评估其对耐药菌株的协同作用。

化学合成抗菌衍生物：通过化学修饰天然抗菌化合物得到的衍生物，如黄酮衍生物、生物碱衍生物，检测其对耐药菌株的活性。

益生菌代谢提取物：益生菌（如乳酸菌、双歧杆菌）发酵产生的代谢物，包括有机酸、细菌素、短链脂肪酸，评估其对耐药菌的抑制作用。

纳米材料负载提取物：纳米载体（如二氧化硅、脂质体、聚合物纳米粒）负载的提取物，检测其对耐药菌株的靶向活性及缓释效果。

动物源天然提取物：动物组织（如肝脏、脾脏）或分泌物（如唾液、胆汁）中的提取物，包括肽类、酶类化合物，评估其对耐药菌株的敏感性。

发酵食品提取物：如酱油、醋、发酵乳制品（如酸奶、奶酪）、发酵豆制品（如豆豉、腐乳）中的提取物，检测其对耐药菌的抑制效果。

农业废弃物提取物：农作物秸秆（如玉米秸秆、小麦秸秆）、果皮（如柑橘皮、苹果皮）、果渣（如葡萄渣、梨渣）等废弃物中的提取物，评估其对耐药菌株的活性。

化妆品提取物：化妆品中的天然抗菌成分，如植物精油、提取物，检测其对耐药菌的抑制作用，符合化妆品安全标准。

检测标准

CLSI M07-A11：肉汤稀释法测定抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，适用于提取物对耐药菌株的MIC检测。

ISO 20776-1：临床实验室抗菌药物敏感性测试标准，规定了体外药敏试验的一般要求和方法。

GB/T 20929-2007：抗菌药物体外药效学研究技术指导原则，适用于提取物抗菌活性的研究。

ASTM E2313：天然产物抗菌活性测定的标准方法，包括纸片扩散法和肉汤稀释法。

EUCAST guidelines：欧洲抗菌药物敏感性测试委员会标准，提供了耐药菌株敏感性测试的最新方法和判断标准。

GB/T 16886.5-2017：医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验，用于评估提取物对细胞内菌的影响及细胞毒性。

CLSI M100：抗菌药物敏感性测试执行标准，规定了药敏试验的质量控制和结果判断标准。

ISO 13727：化妆品抗菌活性评估的标准方法，适用于化妆品中提取物的抗菌活性检测。

GB/T 34855-2017：中药提取物抗菌活性测定方法，规定了中药提取物抗菌活性的测定步骤和结果计算方法。

WHO Technical Report Series 953：抗菌药物耐药性监测指南，提供了耐药菌株监测的框架和方法。

CLSI M22-A3：厌氧菌抗菌药物敏感性测试标准，适用于厌氧耐药菌株的敏感性检测。

检测仪器

微量肉汤稀释仪：用于自动化制备系列浓度的提取物溶液，支持96孔板和384孔板格式，加样体积范围1~100μL，加样精度±1%，提高试验重复性。

酶标仪：测定微生物生长过程中的吸光度变化，波长范围400~750nm，检测限0.001A，支持动力学检测模式，用于时间-杀菌曲线和MIC测定。

生物安全柜：提供无菌操作环境，保护操作人员及样品免受污染，符合ISO 14644-1 Class 2标准，用于微生物样品的接种、培养和处理。

实时荧光定量PCR仪：用于检测耐药基因（如blaCTX-M、mecA、vanA）的表达水平，支持多通道（FAM、VIC、ROX、Cy5）检测，扩增效率90%~110%，检测灵敏度≤10 copies/μL。

流式细胞仪：分析细胞内耐药菌株的感染情况及清除率，检测速度≥10000细胞/秒，荧光灵敏度≤100MESF，支持荧光素（FITC、PE、APC）标记。

恒温摇床：模拟体内动态环境，用于时间-杀菌曲线和体外动态杀菌试验，转速范围0~3000rpm，温度范围4~60℃，温度精度±0.5℃，支持 orbital 振荡模式。

超净工作台：用于微生物样品的接种和培养，洁净等级Class 100，风速0.3~0.5m/s，采用HEPA过滤器，过滤效率≥99.99%。

高压蒸汽灭菌器：对实验器材（如试管、培养皿）和培养基进行灭菌，温度范围105~138℃，压力范围0.1~0.3MPa，灭菌时间15~60分钟，符合ISO 11135标准。

菌落计数器：自动计数平板上的菌落数量，采用图像识别技术，计数精度±1%，支持图像存储和分析，用于MBC和PAE测定。

离心机：分离细胞和培养液，转速范围0~15000rpm，最大离心力21000×g，容量范围0.2~50mL，用于胞内菌清除率试验中的细胞收集。