真菌根际定殖能力检测

检测项目

根际土壤真菌定殖量：测定根际土壤中目标真菌的种群数量，采用稀释平板计数法，检测下限10²CFU/g干土，重复3次取平均值。

根系组织内真菌定殖率：计算真菌侵入根系皮层组织的比例，采用台盼蓝染色镜检法，统计100条根段的定殖率，精度±5%。

真菌菌丝密度：测量根际土壤中真菌菌丝的长度，用网格交叉法，检测范围0.1~100m/g干土，误差≤10%。

根际真菌活性：通过荧光素二乙酸（FDA）水解法测定真菌细胞的代谢活性，荧光强度检测范围10~1000RFU，重复性RSD≤8%。

真菌与根毛附着率：统计根毛表面附着的真菌孢子/菌丝比例，采用扫描电镜观察，计数200根根毛，精度±3%。

根际土壤真菌生物量：用磷脂脂肪酸（PLFA）分析法测定真菌特异性脂肪酸（如18:2ω6,9）的含量，检测下限0.1nmol/g干土。

真菌共生效率指数：计算菌根植物与非菌根植物的生物量比，测量植株地上部干重，误差≤5%。

根际真菌空间分布：通过荧光原位杂交（FISH）技术定位真菌在根际微域的分布，分辨率≤10μm，支持多色荧光标记。

真菌孢子萌发率：测定根际土壤中真菌孢子的萌发能力，在25℃恒温培养箱中培养48小时后统计萌发率，精度±4%。

根际真菌代谢产物含量：检测根际土壤中真菌分泌的有机酸（如草酸、柠檬酸）含量，采用高效液相色谱法（HPLC），检测下限0.01mg/L。

真菌菌丝活力：通过四唑盐（TTC）还原法测定菌丝的呼吸活性，红色还原产物含量检测范围0.1~100μg/g菌丝，重复性RSD≤7%。

根际土壤真菌多样性：采用JianCe基因测序法分析真菌群落组成，测序深度≥10000条/样品，覆盖度≥99%。

检测范围

菌根菌剂：包括丛枝菌根真菌（AMF）、外生菌根真菌（ECM）、内生菌根真菌等微生物菌剂产品。

生物肥料：含真菌活性成分的生物有机肥、复合微生物肥料、有机-无机复混肥等。

作物植株：小麦、玉米、水稻、大豆、棉花、蔬菜（番茄、黄瓜、生菜）、果树（苹果、梨、柑橘）等作物的根际样品。

苗木花卉：园林苗木（法桐、国槐、雪松）、观赏花卉（月季、百合、菊花）的根系及根际土壤。

药用植物：人参、当归、黄芪、丹参、三七等药用植物的根际微生态系统。

土壤修复材料：用于重金属污染（镉、铅、铬）、有机污染（石油烃、多环芳烃）土壤修复的真菌菌剂及改良材料。

微生物接种剂：农业生产中使用的真菌接种剂（如 Trichoderma 属、Glomus 属）产品。

植物-微生物共生体系：实验室构建的拟南芥-真菌、烟草-真菌等植物与真菌共生模型系统。

生态恢复工程：矿山复绿、退耕还林、湿地修复等生态工程中的根际土壤样品。

转基因植物：转抗真菌基因（如 chitinase 基因、glucanase 基因）或促生基因（如 ACC 脱氨酶基因）植物的根际真菌定殖研究样品。

林业苗木：松树、柏树、杨树等林业苗木的根际真菌定殖情况检测。

草坪草：高尔夫球场、城市绿地草坪草的根际土壤真菌群落分析。

检测标准

ISO 11074:2012 土壤质量 - 真菌生物量的测定 - 磷脂脂肪酸分析法。

GB/T 32723-2016 微生物肥料中真菌的检测方法。

ASTM D5907-20 土壤中丝状真菌定殖量的测定 - 稀释平板法。

NY/T 2321-2013 菌根菌剂质量评价技术规范。

ISO 16072:2002 土壤质量 - 根际土壤样品的采集与处理。

GB/T 20873-2007 微生物肥料检验规程。

ASTM D7322-18 植物根系中真菌定殖率的测定 - 染色镜检法。

NY/T 1971-2010 生防真菌制剂质量检测技术规范。

ISO 20136:2018 土壤质量 - 真菌菌丝密度的测定 - 网格交叉法。

GB/T 38082-2019 生物肥料中功能微生物的测定。

NY/T 3486-2019 微生物菌剂中丛枝菌根真菌的检测方法。

ISO 17924:2016 土壤质量 - 真菌代谢活性的测定 - 荧光素二乙酸水解法。

检测仪器

荧光显微镜：配备UV、蓝光、绿光荧光滤镜组，用于观察根系组织中真菌的定殖情况及活性状态，分辨率≤0.2μm，支持拍照及图像分析。

高压灭菌锅：用于土壤、根系样品及培养基的灭菌处理，工作压力121kPa，温度121℃，灭菌时间0~120分钟可调，确保检测过程无杂菌污染。

恒温培养箱：用于真菌孢子萌发、菌丝生长及菌根共生体系培养，温度范围4~60℃，精度±0.5℃，支持12/12小时光周期设置，湿度控制范围40%~90%。

电子天平：用于称量土壤、根系样品的干重及培养基成分，最大称量200g，精度0.001g，满足真菌生物量计算及定殖率统计需求。

高效液相色谱仪（HPLC）：配备紫外检测器（UV）、二极管阵列检测器（DAD），用于测定根际土壤中真菌代谢产物（如草酸、柠檬酸、几丁质酶）的含量，检测下限0.01mg/L，流速范围0.1~5mL/min，柱温箱温度范围10~80℃。

扫描电子显微镜（SEM）：用于观察真菌在根毛表面的附着状态及菌丝形态，分辨率≤1nm，支持二次电子成像（SEI）及背散射电子成像（BSEI），加速电压0.5~30kV。

实时荧光定量PCR仪（qPCR）：用于定量检测根际土壤中目标真菌（如 Glomus intraradices、Trichoderma harzianum）的DNA含量，检测下限10 copies/μL，扩增效率90%~110%，支持多重PCR反应。

酶标仪：用于测定真菌活性相关的酶类（如几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶）活性及荧光素二乙酸（FDA）水解产物的荧光强度，波长范围400~750nm，检测精度±1%，支持96孔板、384孔板同步检测。

土壤粉碎机：用于根际土壤样品的均质处理，转速0~3000rpm，筛网孔径0.25mm、0.5mm、1mm可选，确保样品均匀性，避免真菌菌丝断裂。

离心机：用于分离根际土壤与根系组织、沉淀真菌孢子及菌丝，最大转速10000rpm，离心力12000×g，支持50mL、100mL离心管批量处理，温度控制范围4~25℃。

磷脂脂肪酸分析仪（PLFA）：用于测定根际土壤中真菌生物量，分离提取磷脂脂肪酸，通过气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）分析真菌特异性脂肪酸（如18:2ω6,9）的含量，检测下限0.1nmol/g干土。

荧光原位杂交系统（FISH）：配备荧光显微镜及杂交仪，用于定位根际土壤中真菌的空间分布，支持多色荧光标记（FITC、Cy3、Cy5），分辨率≤10μm，可识别特定真菌属种（如 Glomus、Rhizophagus）。