幽门螺杆菌定植培养检测

检测项目

胃黏膜样本培养：需氧与微需氧环境同步培养，使用含万古霉素、多粘菌素B的选择性培养基，培养温度37±1℃，观察周期3-7天。

菌落形态学鉴定：记录典型菌落特征，包括直径0.5-1mm、灰白色半透明、边缘光滑湿润等形态学指标。

尿素酶快速试验：检测细菌尿素酶活性，反应体系含2%尿素酚红溶液，阳性结果判读时间为10-120分钟呈粉红色。

氧化酶活性检测：使用1%四甲基对苯二胺试纸条，30秒内菌落呈现深紫色为阳性判定标准。

过氧化氢酶试验：3%过氧化氢溶液滴注菌落，立即产生气泡为阳性反应特征。

革兰染色镜检：油镜下观察S形、螺旋形或海鸥状革兰阴性杆菌，鞭毛数量1-6根。

抗菌药物敏感性试验：采用琼脂稀释法，测试甲硝唑（浓度梯度1-256μg/mL）、克拉霉素（0.03-32μg/mL）、阿莫西林（0.015-256μg/mL）的最小抑菌浓度。

cagA基因PCR检测：扩增片段长度349bp，退火温度55℃±2℃，循环次数35次。

vacA基因分型：检测s1/s2、m1/m2等位基因型，PCR产物分析采用2%琼脂糖凝胶电泳。

生物膜形成能力测定：96孔板结晶紫染色法，OD570nm值≥0.12判定为阳性。

碱性磷酸酶标记试验：检测细菌表面碱性磷酸酶活性，反应底物为硝基苯酚磷酸盐，405nm波长读值。

溶血活性检测：5%绵羊血琼脂平板培养，观察β溶血环形成直径≥2mm为阳性。

检测范围

胃黏膜活检标本：经内镜采集的胃窦、胃体部黏膜组织块。

胃液抽吸物：空腹状态下获取的胃液离心沉淀物。

口腔牙菌斑样本：龈下刮治获取的龈缘生物膜样本。

粪便样本：采用免疫磁珠富集法处理的粪便悬液。

上消化道手术切除组织：胃癌或溃疡病变手术标本。

细胞培养模型：胃上皮细胞系共培养感染模型。

抗菌药物体外研究：新型化合物抑菌效果评价体系。

益生菌拮抗实验：乳酸杆菌等益生菌抑制效果测试。

食品污染溯源：生乳及肉制品中病原体分离培养。

饮用水系统：管道生物膜中存活菌株的复苏培养。

检测标准

ISO 11731-2:2004 水质-细菌检测-第2部分：弯曲菌属定量检测

GB/T 14926.42-2001 实验动物 微生物学检测方法

WS/T 249-2005 幽门螺杆菌感染的细菌学诊断标准

CLSI M45-A3 需氧菌药敏试验方法

ISO 10272-1:2017 食品链微生物学-弯曲菌检测计数

GB/T 20944.3-2008 纺织品抗菌性能评价 第3部分：振荡法

JIS K 3700:2008 食品中弯曲菌检测方法

检测仪器

三气培养箱：维持85% N₂、10% CO₂、5% O₂的恒温恒湿环境，温度波动度±0.5℃。

厌氧工作站：氧浓度控制范围0-5ppm，内置37℃恒温培养区。

生物安全柜：提供Ⅱ级A2型防护，进气流速0.38±0.025m/s。

全自动微生物鉴定系统：基于比色法数据库，可分析96项生化反应。

梯度PCR仪：温控精度±0.1℃，支持Touch down程序。

凝胶成像分析系统：CCD分辨率≥500万像素，紫外透射波长302nm。

酶标仪：检测波长范围340-850nm，震荡速度300-900rpm可调。

显微成像系统：具备100×油镜相位差镜头，图像分辨率2048×1536像素。