自噬流LC3免疫印迹检测

检测项目

LC3-I检测：检测LC3-I蛋白基础水平。蛋白丰度定量、分子量测定约16kDa。

LC3-II检测：检测LC3-II磷脂酰乙醇胺结合形式。蛋白丰度定量、迁移率分析约14kDa。

LC3-II/I比值计算：评估自噬流活性。比值标准化计算、相对丰度测定阈值0.5-2.0。

自噬诱导评估：分析自噬激活状态。时间过程监测、诱导剂处理响应参数。

自噬抑制评估：检测自噬阻滞效应。抑制剂处理响应、蛋白转化率变化。

内参蛋白检测：确保数据标准化。β-actin定量、分子量42kDa测定。

蛋白提取效率：评估样本制备质量。总蛋白浓度测量、纯度分析吸光度260/280nm。

抗体特异性验证：确认检测特异性。阴性对照测试、阻断实验参数。

膜转移效率：评估印迹转移效果。转移百分率测定、均匀性分析。

信号定量分析：进行Western blot定量。积分光密度测量、信噪比阈值大于3。

检测范围

哺乳动物细胞系：体外细胞培养样本用于基础自噬研究。

肿瘤组织样本：临床活检组织用于癌症自噬评估。

神经退行模型：动物脑组织样本用于疾病机制分析。

药理研究样本：药物处理细胞用于自噬调控研究。

植物生理样本：植物叶片用于自噬应激响应分析。

病毒感染模型：感染细胞用于病原诱导自噬检测。

转基因动物样本：基因修饰模型用于自噬通路验证。

环境应激样本：氧化胁迫细胞用于自噬适应性评估。

酵母模型：酵母细胞用于进化保守自噬研究。

衰老研究样本：老化组织用于自噬相关性分析。

检测标准

ISO 15189:2012医学实验室质量和能力要求。

GB/T 27407-2010实验室质量控制规范。

ASTM E2800-11蛋白质免疫印迹标准指南。

ISO 17025:2017检测和校准实验室能力要求。

GB/T 6682-2008分析实验室用水规格。

检测仪器

离心机：用于细胞裂解和样品沉淀。功能：离心分离细胞碎片和澄清上清液。

电泳装置：进行蛋白质SDS-PAGE分离。功能：基于分子量分离LC3蛋白组分。

印迹系统：实现蛋白质膜转移。功能：将LC3蛋白从凝胶转移至PVDF膜。

成像系统：检测免疫印迹信号。功能：定量分析LC3条带光密度强度。

微孔板阅读器：辅助定量数据采集。功能：测量光密度用于标准曲线校准。