后生元活性检测

检测项目

代谢物含量测定：定量后生元中短链脂肪酸（如乙酸、丙酸、丁酸）、多糖、肽类等活性成分的含量，采用高效液相色谱法（HPLC），检测限0.1μg/mL，定量精度±5%。

免疫细胞因子诱导能力：评估后生元对免疫细胞（如巨噬细胞、T细胞）分泌细胞因子（IL-10、TNF-α、IFN-γ）的影响，采用ELISA法，线性范围1-1000pg/mL，吸光度精度±0.001OD。

肠道上皮细胞屏障保护作用：检测后生元对肠道上皮细胞（如Caco-2细胞）紧密连接蛋白（occludin、claudin-1）表达及跨上皮电阻（TEER）的影响，TEER测量量程0-2000Ω·cm²，精度±5Ω·cm²，蛋白表达采用Western blot法，定量精度±10%。

抗炎活性：测定后生元抑制炎症细胞（如RAW264.7巨噬细胞）产生炎症介质（NO、PGE₂、COX-2）的能力，NO检测采用Griess法，量程1-100μmol/L，COX-2表达采用实时荧光定量PCR法，检测限10拷贝/μL。

抗氧化能力：评估后生元清除自由基（DPPH、ABTS）及还原能力（FRAP），DPPH自由基清除率测量范围0-100%，FRAP值量程0-2000μmol Fe²⁺/L，检测精度±2%。

肠道菌群调节作用：分析后生元对肠道菌群组成的影响（如促进双歧杆菌、乳酸菌增殖，抑制大肠杆菌、沙门氏菌生长），采用16S rRNA基因测序法，覆盖99%以上菌群种类，分辨率10000。

细胞增殖/凋亡影响：检测后生元对目标细胞（如肠道上皮细胞、免疫细胞）增殖（CCK-8法）及凋亡（Annexin V/PI流式检测）的作用，CCK-8法检测灵敏度0.01OD，凋亡率测量精度±3%。

糖脂代谢调节能力：评估后生元对细胞葡萄糖摄取（2-NBDG荧光法）及脂滴形成（油红O染色）的影响，葡萄糖摄取率量程0-100%，脂滴形成抑制率精度±5%。

黏膜免疫激活作用：测定后生元对黏膜免疫细胞（如肠黏膜淋巴细胞）分泌分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的影响，采用ELISA法，最低检测限1ng/mL，线性范围1-1000ng/mL。

体内活性验证：在动物模型（如小鼠结肠炎模型、肥胖模型）中评估后生元对体重、粪便短链脂肪酸含量、肠道炎症评分的影响，粪便短链脂肪酸采用GC-MS法检测，定量限0.05μmol/g，炎症评分采用组织病理学评分法，精度±0.5分。

检测范围

发酵食品后生元：酸奶、发酵蔬菜、泡菜、发酵豆制品等食品中的微生物代谢产物（如乳酸、乙酸、多肽）。

植物源后生元：植物提取物中的活性成分（如黄芪多糖、枸杞黄酮、茶多酚），来源于植物发酵或提取过程。

微生物发酵产物：益生菌（如乳杆菌、双歧杆菌）发酵后的上清液、细胞裂解物，包含代谢物和胞内成分。

乳制品后生元：乳清蛋白发酵产物、乳糖发酵代谢物（如半乳糖、乳酸），用于乳制品深加工。

功能性食品配料：添加到饮料、饼干、营养补充剂中的后生元成分（如短链脂肪酸酯、免疫调节肽）。

饲料添加剂：动物饲料中的后生元成分（如发酵豆粕代谢物、酵母提取物），用于改善动物肠道健康。

化妆品原料：具有抗炎、保湿或修复作用的后生元（如神经酰胺、肽类、多糖），用于护肤品开发。

医药中间体：用于药物开发的后生元活性成分（如抗菌肽、免疫调节剂），需符合医药级纯度要求。

宠物食品配料：宠物零食中的后生元成分（如发酵鸡肉代谢物、植物提取物），用于提升宠物肠道健康。

农业生物制品：促进植物生长的后生元（如微生物代谢产生的生长素、赤霉素），用于有机农业生产。

保健食品原料：具有特定保健功能（如调节肠道菌群、增强免疫力）的后生元，需符合保健食品原料要求。

检测标准

ISO 20766-2019 食品中后生元的术语和定义

GB/T 31636-2014 益生菌代谢产物功能评价通则

ISO 17025-2017 检测和校准实验室能力通用要求

GB/T 34221-2017 食品中短链脂肪酸的测定 气相色谱法

ISO 19458-2021 饲料添加剂 后生元的鉴定和定量方法

GB/T 29602-2013 食品安全国家标准 食品添加剂 乳铁蛋白

ISO 10993-5-2017 医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验

GB/T 1886.312-2021 食品安全国家标准 食品添加剂 植物提取物通则

ISO 22118-2017 食品微生物学 益生菌的测定

GB/T 23747-2009 饲料中氨基酸的测定 高效液相色谱法

ISO 16000-6-2011 室内空气 第6部分：挥发性有机化合物（VOC）的测定 热解吸/气相色谱法

检测仪器

高效液相色谱仪（HPLC）：用于分离和定量后生元中的代谢物（如短链脂肪酸、肽类、多糖），配备紫外-可见检测器（UV-Vis）和荧光检测器（FLD），检测限0.1μg/mL，定量精度±5%，流速范围0.1-10mL/min。

酶联免疫吸附测定仪（ELISA reader）：用于检测免疫细胞因子（如IL-10、TNF-α）、sIgA等蛋白类活性成分的含量，支持96孔/384孔板检测，线性范围1-1000pg/mL，吸光度精度±0.001OD，波长范围400-750nm。

跨上皮电阻仪（TEER仪）：用于测量肠道上皮细胞（如Caco-2、HT-29）的屏障功能，通过电极检测细胞单层的电阻值，量程0-2000Ω·cm²，精度±5Ω·cm²，支持实时监测（每10秒记录一次数据）。

气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）：用于分析粪便、食品或发酵产物中的短链脂肪酸（如乙酸、丙酸、丁酸），采用毛细管柱分离，电子轰击电离（EI）源，定量限0.05μmol/g，分辨率10000，扫描范围50-500m/z。

流式细胞仪：用于检测细胞凋亡（Annexin V/PI双染色）、免疫细胞表型（如CD4⁺、CD8⁺ T细胞）及细胞因子 intracellular 染色，支持≥4个荧光通道（FITC、PE、PerCP、APC），检测速度≥10000细胞/秒，数据存储量≥1×10⁶细胞/样本。

多功能微孔板 reader：用于检测抗氧化能力（DPPH、ABTS、FRAP）、细胞活力（CCK-8、MTT）及荧光标记物（如2-NBDG葡萄糖摄取），支持吸光度（200-900nm）、荧光（激发300-700nm，发射350-800nm）、化学发光检测，检测精度±2%。

16S rRNA基因测序仪：用于分析肠道菌群组成及多样性，采用Illumina或PacBio平台，读长≥250bp，覆盖16S rRNA基因的V3-V4区，测序深度≥10000 reads/样本，可鉴定到属水平（部分到种水平）。

细胞培养箱：用于体外细胞实验（如肠道上皮细胞、免疫细胞、微生物培养），控制温度（37±0.5℃）、CO₂浓度（5±0.1%）、湿度（≥95%），配备HEPA过滤器（过滤效率≥99.99%），防止污染。

实时荧光定量PCR仪（qPCR仪）：用于检测炎症介质（如COX-2、iNOS）、紧密连接蛋白（如occludin、claudin-1）的基因表达水平，支持SYBR Green和TaqMan探针法，检测限10拷贝/μL，线性范围10²-10⁸拷贝/μL，扩增效率90%-110%。

动物行为学分析系统：用于体内活性验证中的动物行为评估（如小鼠结肠炎模型的体重变化、粪便性状，肥胖模型的进食量、活动量），配备视频摄像头（分辨率1920×1080）和软件（如EthoVision），支持自动跟踪动物运动轨迹、记录进食时间/量、计算活动量，数据精度±1%。