细胞活性氧簇荧光探针检测检测

检测项目

总ROS水平检测：利用通用型荧光探针（如DCFH-DA）检测细胞内总ROS的相对含量，检测范围为10~1000nM（以H2O2当量计），检测波长为488nm激发/525nm发射，批内变异系数≤5%。

超氧阴离子（O2•-）检测：使用特异性探针（如DHE）检测细胞内O2•-水平，检测下限为5nM，线性范围5~500nM，激发/发射波长为510nm/580nm，样本回收率≥90%。

过氧化氢（H2O2）检测：采用荧光探针（如Amplex Red）定量检测样本中H2O2含量，检测精度±5%，线性范围1~100nM，激发/发射波长为563nm/587nm，检测时间≤30分钟。

羟基自由基（•OH）检测：利用特异性探针（如HPF）检测细胞内•OH水平，检测下限为2nM，线性范围2~200nM，激发/发射波长为490nm/515nm，信号-to-noise比≥10:1。

过氧亚硝基阴离子（ONOO-）检测：使用荧光探针（如DHR123）检测ONOO-含量，检测范围1~500nM，激发/发射波长为488nm/525nm，批间变异系数≤8%。

线粒体ROS检测：采用线粒体靶向荧光探针（如MitoSOX Red）检测线粒体来源的ROS，检测下限为1nM，线性范围1~100nM，激发/发射波长为510nm/580nm，共定位效率≥95%（与线粒体标记物对比）。

细胞内ROS动态监测：通过活细胞成像系统实时监测细胞内ROS水平变化，时间分辨率为1s/帧，检测时长可达24小时，数据采样率≥1帧/秒，支持多区域同步监测。

组织样本ROS检测：对冷冻或固定组织切片进行荧光探针标记，检测组织中ROS的分布及含量，空间分辨率为0.5μm，荧光强度定量误差≤7%，支持多切片平行处理。

血清/血浆ROS检测：利用荧光探针检测血清或血浆中的总ROS水平，样本用量为50~100μL，检测时间≤2小时，线性范围5~500nM（以H2O2当量计），最低检测限为3nM。

药物诱导ROS生成动力学检测：监测药物处理后细胞内ROS水平随时间的变化，时间间隔为1min，持续时间为60min，数据拟合度≥0.95（采用指数模型），支持多浓度药物同时检测。

荧光探针装载效率检测：评估荧光探针进入细胞的效率，检测指标为探针装载率（%），线性范围10%~90%，检测精度±3%，装载时间优化为30~60分钟（根据细胞类型调整）。

检测范围

细胞系样本：包括肿瘤细胞（如HepG2、A549、MCF-7）、正常细胞（如HEK293、HUVEC、L929）等，用于研究细胞氧化应激状态及药物作用机制。

原代细胞样本：如小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）、人外周血单核细胞（PBMC）、大鼠心肌细胞等，用于评估原代细胞对生理或病理刺激的ROS响应。

组织样本：如肝脏、心脏、脑组织、肾脏等冷冻或固定切片，用于检测组织病理过程（如缺血再灌注损伤、 neurodegeneration）中的ROS分布。

微生物样本：如细菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）、真菌（白色念珠菌、 Aspergillus niger）等，用于研究微生物氧化应激机制及抗菌药物的作用靶点。

植物样本：如植物叶片、根组织、种子等（如拟南芥、水稻、小麦），用于评估植物在逆境（如干旱、重金属污染、盐胁迫）下的ROS水平及抗氧化系统响应。

药物筛选样本：如候选化合物（小分子药物、生物制品）处理后的细胞样本，用于检测药物对ROS生成的影响（促进或抑制），支持高通量筛选（≥1000化合物/天）。

化妆品原料样本：如抗氧化成分（如维生素C、谷胱甘肽、艾地苯醌）处理后的细胞，用于评估原料的抗氧化效能（如ROS抑制率）。

环境污染物样本：如重金属离子（Pb2+、Cd2+、Hg2+）、有机污染物（如多环芳烃、邻苯二甲酸酯）、大气颗粒物（PM2.5）处理后的细胞，用于检测污染物的氧化应激效应。

生物体液样本：如血清、血浆、尿液、脑脊液等，用于临床研究中疾病（如糖尿病、心血管疾病、慢性肾病）患者的ROS水平监测。

干细胞样本：如胚胎干细胞（ESC）、诱导多能干细胞（iPSC）、间充质干细胞（MSC）等，用于研究干细胞分化、自我更新过程中的ROS变化及调控机制。

病毒感染样本：如新冠病毒（SARS-CoV-2）、HIV、乙肝病毒（HJianCe）感染后的细胞样本，用于检测病毒感染对细胞ROS水平的影响及免疫反应关联。

检测标准

GB/T 39725-2020 细胞内活性氧簇（ROS）检测 荧光探针法：规定了细胞内ROS检测的样本制备、探针选择、检测流程及数据处理要求，适用于细胞系及原代细胞样本。

ISO 20186-1:2019 生物技术 细胞治疗产品的检测 第1部分：细胞内活性氧簇的测定：适用于细胞治疗产品（如CAR-T细胞、干细胞制品）中ROS水平的质量控制，规定了检测方法的验证要求。

ASTM E2945-14(2020) 用荧光探针检测细胞内活性氧的标准试验方法：描述了使用荧光探针（如DCFH-DA、DHE）检测细胞内ROS的具体操作步骤，包括样本处理、荧光强度测定及结果计算。

YY/T 1744-2021 医疗器械 细胞毒性试验 活性氧簇检测法：用于医疗器械（如植入式器件、敷料）生物相容性评价中，通过检测细胞ROS水平评估其细胞毒性。

SN/T 5346-2021 进出口食品中抗氧化剂功效评价 细胞内活性氧簇检测法：规定了食品中抗氧化成分（如茶多酚、维生素E）对细胞ROS抑制作用的检测方法，适用于进出口食品的质量检测。

ISO 10993-5:2017 医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验：其中包含ROS检测作为细胞毒性的补充指标，要求检测方法需经有效性验证。

GB/T 21767-2008 饲料添加剂 抗氧化剂效力的测定 细胞内活性氧法：适用于饲料添加剂（如乙氧基喹啉、BHT）中抗氧化成分的功效评价，规定了ROS抑制率的计算方法。

ASTM E3085-17 用荧光显微镜测定组织切片中活性氧簇的标准试验方法：描述了组织样本（如冷冻切片、石蜡切片）中ROS检测的荧光显微镜操作流程，包括切片制备、探针标记及图像分析。

GB/T 38496-2020 化妆品 抗氧化功效评价 细胞内活性氧簇检测法：规定了化妆品原料及产品（如面霜、精华液）抗氧化功效的检测方法，要求ROS抑制率≥50%（针对特定浓度）。

ISO 13485:2016 医疗器械质量管理体系 用于法规的要求：其中要求ROS检测作为医疗器械安全性评价的一部分，需符合相关标准的检测流程及数据记录要求。

检测仪器

荧光显微镜：具备高灵敏度CCD相机（≥1600万像素）及滤光片组（匹配常用荧光探针波长），用于观察细胞内荧光探针标记的ROS分布，可实现单通道或多通道成像，空间分辨率≤0.2μm，支持图像叠加及定量分析。

流式细胞仪：配备488nm氩离子激光（功率≥20mW）和561nm半导体激光（功率≥10mW），用于定量检测细胞内ROS的荧光强度，支持多参数分析（如细胞周期与ROS水平联合检测），检测速度≥10000细胞/秒，荧光检测通道≥3个。

微孔板读板机（荧光型）：具备荧光检测模块（波长范围400~700nm），支持96孔/384孔板检测，用于高通量定量分析细胞或生物体液中ROS水平，检测下限为1nM（以H2O2当量计），板间变异系数≤6%，支持自动进样及温度控制（25~37℃）。

激光共聚焦扫描显微镜：具备多激光激发（405nm、488nm、561nm、633nm）及共聚焦成像功能，用于实时监测活细胞内ROS的动态变化，时间分辨率≤1s/帧，可实现3D重构（z轴步进≤0.1μm），支持荧光共振能量转移（FRET）分析。

高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）：配备C18色谱柱（粒径5μm，柱长250mm）及荧光检测器（激发/发射波长可调），用于分离和定量检测样本中荧光探针的氧化产物，检测下限为0.1nM，线性范围1~1000nM，保留时间变异系数≤2%。

活细胞成像系统：配备 incubation chamber（温度控制±0.5℃，CO2浓度控制±0.1%）及自动聚焦功能，用于长时间监测活细胞内ROS水平的变化（如24小时），时间间隔可设置为1~60min，支持多视野同步监测（≥4视野/板），数据存储格式为TIFF或AVI。

荧光分光光度计：具备高分辨率单色器（带宽≤2nm）及低噪声光电倍增管（检测限≤10-12 W），用于检测溶液中荧光探针的荧光强度，激发/发射波长范围为200~800nm，线性范围10-9~10-5 M，信噪比≥50:1。

分选型流式细胞仪：具备细胞分选功能（分选速度≥1000细胞/秒），可将ROS水平不同的细胞亚群分离（如高ROS组、低ROS组），用于后续分子生物学分析（如RNA-seq、蛋白免疫印迹），分选纯度≥95%，回收率≥80%。

全内反射荧光显微镜（TIRFM）：具备全内反射激发模式（入射角可调），用于检测细胞表面或近膜区域的ROS水平，空间分辨率≤100nm（侧向），时间分辨率≤10ms，支持单分子荧光追踪（如ROS生成位点的动态监测）。

微流控芯片分析仪（荧光检测）：配备微流控芯片（通道宽度≤100μm）及荧光检测器，用于微体积样本（≤10μL）中的ROS检测，检测速度≥10样本/分钟，检测下限为2nM（以H2O2当量计），适用于稀有样本（如脑脊液、微量细胞）的分析。