过氧化氢诱导衰老模型建立检测

检测项目

细胞活力检测（CCK-8法）：评估过氧化氢处理后细胞的存活能力，检测范围0.1~100%，检测精度±5%

丙二醛（MDA）含量测定：反映脂质过氧化程度，采用硫代巴比妥酸法，检测下限0.1μmol/L，线性范围0.1~10μmol/L

超氧化物歧化酶（SOD）活性测定：检测抗氧化酶活性，采用黄嘌呤氧化酶法，单位U/mg蛋白，检测范围10~1000U/mg蛋白

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性测定：评估抗氧化能力，采用二硫代二硝基苯甲酸法，单位U/mg蛋白，检测下限5U/mg蛋白

衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色阳性率：反映细胞衰老状态，采用细胞化学染色法，计数1000个细胞中的阳性细胞比例，误差±3%

活性氧（ROS）水平检测：采用荧光探针DCFH-DA法，检测细胞内ROS荧光强度，线性范围10~1000RFU，检测灵敏度1RFU

端粒长度测定（qPCR法）：分析端粒DNA相对长度，采用2-ΔΔCt法，检测精度±2%，样本量需求100ng基因组DNA

p16INK4a基因表达水平检测（RT-qPCR）：检测衰老相关基因表达，单位相对表达量（vs.内参基因），检测下限10 copies/μL

胶原蛋白含量测定（Sirius Red染色法）：定量细胞外基质胶原蛋白，检测范围1~100μg/mL，吸光度检测波长540nm

细胞周期分析（流式细胞术）：检测G1期细胞比例，采用PI染色法，检测精度±2%，样本量需求1×10^6细胞

线粒体膜电位检测（JC-1法）：评估线粒体功能状态，采用荧光探针JC-1，红/绿荧光比值范围0.1~10，检测灵敏度0.01比值单位

检测范围

细胞系模型：包括人胚肺成纤维细胞（MRC-5）、小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）等常用衰老模型细胞，用于标准化衰老模型构建

原代细胞模型：如原代人皮肤成纤维细胞、原代大鼠肝细胞等，模拟体内组织衰老状态，反映真实生理环境下的衰老响应

动物组织模型：小鼠肝脏、肾脏、皮肤等组织，检测过氧化氢诱导的体内衰老标志物，评估模型的体内相关性

抗衰药物筛选：候选化合物（如天然提取物、小分子药物）对过氧化氢诱导衰老模型的保护作用评估，为药物研发提供数据支持

化妆品原料评价：抗衰化妆品成分（如维生素C衍生物、多肽）对衰老模型细胞的修复效果检测，验证原料的抗衰功效

干细胞抗衰老研究：干细胞条件培养基对过氧化氢损伤细胞的抗衰老作用评估，探索干细胞的旁分泌效应

氧化应激机制研究：过氧化氢诱导的细胞氧化损伤通路（如MAPK、NF-κB）相关分子检测，解析衰老的分子机制

衰老相关疾病模型：如阿尔茨海默病细胞模型（SH-SY5Y细胞）、糖尿病肾病细胞模型的氧化衰老检测，为疾病机制研究提供模型支持

环境毒素影响评估：环境中过氧化氢类似物（如臭氧、过氧乙酸）对细胞衰老的诱导作用检测，评估环境因素的衰老风险

生物材料相容性：生物材料（如支架材料、植入物）释放的过氧化氢对周围细胞衰老的影响检测，评价材料的生物安全性

中药提取物抗衰研究：中药复方或单体成分（如黄芪多糖、白藜芦醇）对过氧化氢诱导衰老模型的干预效果检测，挖掘传统中药的抗衰潜力

检测标准

GB/T 34796-2017 细胞计数方法通则（用于细胞活力检测中的细胞计数步骤）

ISO 10993-5:2009 医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验（用于细胞模型的毒性评估）

ASTM E1398-91(2019) 用CCK-8法测定细胞活力的标准试验方法（用于细胞活力检测的方法依据）

GB/T 5009.168-2016 食品中丙二醛的测定（用于MDA含量的定量分析）

ISO 23036-1:2021 水质 水中超氧化物歧化酶活性的测定 第1部分：分光光度法（用于SOD活性检测）

GB/T 38483-2020 衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测方法（用于SA-β-Gal阳性细胞的计数）

ASTM F2149-01(2016) 用荧光探针法测定细胞内活性氧的标准试验方法（用于ROS水平检测）

ISO 15663:2004 分子生物学 定量聚合酶链反应（qPCR）的性能评价（用于端粒长度和基因表达检测的方法验证）

GB/T 29603-2013 流式细胞术检测细胞周期的方法（用于细胞周期分析）

ASTM E2313-03(2018) 用Sirius Red染色法测定胶原蛋白含量的标准试验方法（用于胶原蛋白定量）

检测仪器

酶标仪：用于CCK-8法细胞活力检测，检测波长450nm，吸光度范围0~4.0，分辨率0.001A

荧光显微镜：用于SA-β-Gal染色阳性细胞观察，配备CCD相机，分辨率1360×1024像素，激发波长568nm

流式细胞仪：用于细胞周期分析和ROS水平检测，配备488nm氩离子激光器，检测通道≥3个，样本处理能力≥10000细胞/秒

实时荧光定量PCR仪：用于端粒长度和p16INK4a基因表达检测，支持96孔板，荧光检测灵敏度10 copies/反应，扩增效率90%~110%

分光光度计：用于MDA、SOD、GSH-Px等生化指标检测，波长范围200~1000nm，带宽2nm，吸光度精度±0.002A

高压液相色谱仪（HPLC）：用于Sirius Red染色法中胶原蛋白的定量，配备紫外检测器，柱温范围0~80℃，流速0.1~5.0mL/min，检测波长540nm

细胞培养箱：用于过氧化氢诱导衰老模型的细胞培养，温度控制37±0.5℃，CO2浓度5±0.1%，相对湿度≥95%

离心机：用于细胞沉淀收集，最大转速15000rpm，离心力21000×g，容量100mL，配备水平转子

超低温冰箱：用于样本长期保存，温度-80±1℃，有效容积500L，能耗≤1.5kW·h/24h

生物安全柜：用于细胞操作的无菌环境，CLASS II A2型，气流速度0.5m/s，过滤效率≥99.99%（针对0.3μm颗粒）