巴氏杆菌动物检测

检测项目

细菌培养：分离巴氏杆菌病原体样本。具体检测参数为血琼脂培养基类型，培养温度37℃，培养时间24-48小时，需氧条件。

PCR检测：分子识别巴氏杆菌DNA序列。具体检测参数包括靶基因ompA或kmt1，扩增温度94℃变性，55℃退火，72℃延伸，灵敏度10拷贝/μL。

ELISA试验：检测血清抗体水平。具体检测参数使用灭活巴氏杆菌抗原，吸光度测量波长450nm，灵敏度95%，特异性98%。

血清凝集试验：快速诊断血清抗体反应。具体检测参数采用标准抗原溶液，凝集滴度范围1:10至1:320，阳性判定>1:80。

免疫荧光检测：可视化细菌抗原分布。具体检测参数为荧光标记抗体浓度0.1mg/mL，最小检出限10³CFU/mL，显微镜放大倍数400×。

生化试验：鉴定菌种代谢特性。具体检测参数测试糖发酵糖类如葡萄糖乳糖，氧化酶反应阳性，吲哚试验阴性。

抗生素敏感性测试：评估细菌耐药性。具体检测参数为最小抑菌浓度MIC测试范围0.125-256μg/mL，培养基Mueller-Hintonagar。

毒素检测：测定细菌毒素产生。具体检测参数采用细胞培养法，毒素浓度量化单位0.1-10μg/mL，细胞存活率测量。

分子分型：流行病学菌株分析。具体检测参数使用PFGE方法，电泳电压6V/cm，片段大小1-200kbp，相似度计算。

病理组织学：组织切片炎症评估。具体检测参数为HE染色切片厚4μm，显微镜观察坏死灶分布，炎症评分标准。

检测范围

牛血清样本：用于抗体滴度检测和分析。

猪鼻拭子样本：用于病原体分离和培养诊断。

鸡组织样本：如肝脏脾脏用于毒素和组织病理检查。

羊支气管冲洗液：用于细菌培养和PCR检测。

马血液样本：用于血清学试验和分子分析。

宠物动物分泌物：如猫狗鼻腔分泌物检测病原体。

野生动物样本：鹿鸟粪便用于环境流行病学研究。

动物饲料：筛查巴氏杆菌污染和控制质量。

环境样本：土壤水源用于细菌分布监测。

疫苗产品：质量控制检测效力和安全性。

检测标准

OIE陆地动物卫生法典巴氏杆菌病章节。

ISO7218食品和饲料微生物学检测通用要求。

GB/T4789.28微生物培养基制备规范。

ISO17025检测和校准实验室能力通用要求。

GB/T4789.4食品微生物学沙门氏菌检验参考方法。

ASTME2149抗菌活性测定通则。

OIE手册细菌鉴定标准操作程序。

检测仪器

PCR仪：热循环设备用于DNA序列扩增，具体功能为控制温度循环实现靶基因复制。

离心机：高速旋转分离设备用于样本组分分离，具体功能为血清或细胞沉淀分离转速3000-10000rpm。

显微镜：光学放大设备用于细菌形态观察，具体功能为高倍镜检染色样本放大倍数400×-1000×。

培养箱：温度恒定设备用于细菌生长，具体功能为维持37℃恒温环境培养24-48小时。

ELISA阅读器：吸光度测量设备用于抗体定量，具体功能为检测微孔板吸光值波长450nm。

生物安全柜：洁净环境设备用于无菌操作，具体功能为提供HEPA过滤空气防止样本污染。

自动生化分析仪：自动化测试设备用于生化反应，具体功能为执行糖发酵等试验测量吸光度变化。