蛋白纯化检测

检测项目

纯度分析：评估目标蛋白均一性，检测参数包括SDS-PAGE电泳条带密度、反相色谱主峰面积百分比

浓度测定：紫外分光光度法检测，参数为280nm波长吸收值，计算摩尔消光系数

生物活性：细胞增殖抑制率检测，参数为IC50值及剂量效应曲线斜率

宿主蛋白残留：酶联免疫吸附法，检测限值为≤100ppm

内毒素含量：鲎试剂凝胶法，测定范围0.001-100EU/mL

二聚体含量：尺寸排阻色谱法，参数为保留时间11.5min处峰面积比

等电点测定：毛细管等电聚焦，参数为pH梯度3-10迁移位置

肽图分析：胰酶水解后LC-MS检测，参数为特征肽段覆盖率≥95%

无菌检查：薄膜过滤法培养，参数为14天需氧/厌氧菌生长观察

可见异物：灯检法目视检查，参数为≥10μm颗粒物计数

检测范围

单克隆抗体药物：IgG1/IgG4亚型纯度与聚集态分析

重组细胞因子：白细胞介素类分子量确认与比活性测定

疫苗原液：病毒载体空壳率检测与佐剂结合效率评估

诊断试剂核心蛋白：标记效率与批间一致性验证

酶制剂：比活力单位测定及热稳定性参数

血浆分离制品：凝血因子VIII效价及蛋白酶抑制剂含量

基因治疗载体：AAV衣壳蛋白完整性检测

细胞培养上清：收获液目标蛋白表达量初筛

层析填料再生验证：配基脱落率与载量恢复测试

冻干制剂：复溶液不溶性微粒控制

检测标准

USP<1058>生物分析方法验证规范

EP2.6.21蛋白聚集体测定标准

ISO11737-1灭菌工艺验证要求

GB/T16886.7医疗器械生物学评价

ChP2020三部重组制品总论

ICHQ6B生物技术产品规范

ISO21572食品中转基因蛋白检测

GB5009.271食品中内毒素测定

ASTME2694色谱方法验证规程

YY/T1849重组胶原蛋白标准

检测仪器

高效液相色谱仪：反相色谱分离效能评估，C18柱分离度≥1.5

圆二色光谱仪：二级结构分析，扫描范围190-260nm

微量紫外分光仪：蛋白浓度快速测定，光程0.2mm检测池

激光粒度分析仪：聚集体粒径分布检测，动态范围0.3nm-10μm

等温滴定量热仪：结合亲和力测定，温度控制精度±0.02℃