细胞培养与转染检测

检测项目

细胞计数检测：评估细胞数量和密度，参数包括细胞浓度和存活率百分比。

细胞活力检测：测量细胞生存能力，参数如MTT法吸光度或流式细胞术阳性率。

转染效率检测：确定外源基因导入细胞的成功率，参数如荧光蛋白表达百分比或GFP阳性细胞比例。

荧光表达检测：量化报告基因的表达水平，参数如荧光强度或荧光显微镜图像分析。

细胞毒性测试：评估转染试剂或环境对细胞的毒性影响，参数如LD50值或形态变化指数。

基因表达水平检测：测量特定基因的mRNA表达，参数如实时荧光定量PCRCt值或RNA测序丰度。

蛋白表达检测：分析重组蛋白的产生效率，参数如ELISA吸光度或Westernblot密度定量。

细胞形态观察：监测细胞生长状态和结构变化，参数如显微镜成像形态评分或细胞面积计算。

细胞增殖率检测：评估细胞生长速率，参数如倍增时间测定或BrdU掺入率分析。

凋亡检测：测定细胞程序性死亡水平，参数如AnnexinV阳性率或caspase活性荧光读数。

支原体污染检测：识别细胞培养中的微生物污染，参数如PCR扩增曲线或培养法阳性结果。

细胞周期分析：评估细胞分裂阶段分布，参数如流式细胞术DNA含量百分比或G1/S/G2期比例。

检测范围

哺乳动物细胞培养：用于药物筛选和生物制品生产的基础应用。

病毒转染系统：涉及慢病毒或腺病毒载体在基因治疗中的效率评估。

siRNA转染：应用于基因沉默研究中的靶向效率检测。

CRISPR基因编辑：用于基因组修饰效率和脱靶效应的验证。

抗体生产：在杂交瘤或CHO细胞中的重组抗体表达分析。

疫苗开发：细胞培养用于病毒扩增和免疫原性测试环节。

干细胞研究：多能性维持和分化诱导的效率监测。

癌症研究：肿瘤细胞转染用于靶向治疗和耐药性评估。

神经科学：神经元转染用于突触功能和信号通路研究。

药物筛选：高通量检测化合物对细胞活力和基因表达的影响。

生物制品质量控制：细胞系稳定性测试和批次一致性验证。

组织工程：支架材料上的细胞生长和转染效率评价。

检测标准

依据ISO10993-5:2009进行体外细胞毒性试验。

GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分体外细胞毒性试验。

ASTMF2149-01(2021)细胞培养表面生物相容性标准试验方法。

ISO17025:2017检测和校准实验室能力的通用要求。

GB/T27401-2008实验室质量控制规范检测实验室。

ISO20391-1:2018生物技术细胞计数第1部分一般要求。

GB/T37869-2019生物技术细胞培养中支原体检测方法。

ISO14698-1:2003洁净室及相关控制环境生物污染控制。

GB/T16886.22-2022医疗器械生物学评价细胞迁移试验。

ISO19001:2018生物样本库质量和能力通用要求。

检测仪器

流式细胞仪：用于细胞表面标记分析和荧光定量，具体功能包括细胞分群和信号强度测量。

倒置显微镜：用于细胞形态观察和生长状态监测，具体功能如相差成像和荧光检测。

离心机：用于细胞沉淀和分离处理，具体功能如转速控制和温度设定。

实时荧光定量PCR仪：用于基因表达水平分析，具体功能如温度循环和荧光信号采集。

酶标仪：用于比色和荧光检测的定量分析，具体功能如吸光度测量和波长扫描。

细胞计数器：用于自动化细胞计数和活力评估，具体功能如图像识别和浓度计算。

电穿孔仪：用于细胞转染的电脉冲处理，具体功能如电压调节和脉冲时间控制。