流式细胞术细胞焦亡检测

检测项目

膜联蛋白V标记检测：识别早期磷脂酰丝氨酸外翻现象。检测参数：阳性细胞百分比、平均荧光强度。

碘化丙啶摄取分析：评估细胞膜完整性丧失程度。检测参数：晚期死亡细胞比例、双阳性细胞群占比。

Caspase-1激活检测：测定炎症小体通路活化状态。检测参数：活性酶浓度、剪切产物表达强度。

GSDMD蛋白表达分析：检测焦亡执行蛋白裂解状态。检测参数：N端结构域表达量、全蛋白/片段比值。

线粒体膜电位检测：监测线粒体功能失调情况。检测参数：JC-1聚合物/单体比例、荧光偏移度。

活性氧水平测定：量化氧化应激反应程度。检测参数：DCF荧光强度、超氧化物生成速率。

细胞体积变化分析：记录焦亡特征性细胞肿胀。检测参数：前向散射光强度、细胞直径变化率。

炎症因子释放检测：定量细胞溶解后内容物分泌。检测参数：IL-1β浓度、IL-18释放动力学曲线。

DNA断裂标记检测：确认继发性坏死阶段。检测参数：TUNEL阳性率、碎片化指数。

细胞内ATP定量：评估能量代谢崩溃进程。检测参数：三磷酸腺苷浓度、ATP/ADP比值。

溶酶体膜透化检测：监测细胞器稳定性变化。检测参数：溶酶体相关膜蛋白定位、AcridineOrange染色偏移。

检测范围

抗癌药物筛选：评估化疗药物诱导肿瘤细胞焦亡效力。

免疫性疾病研究：分析自身免疫反应中免疫细胞焦亡机制。

病原体感染模型：检测细菌/病毒感染诱发的宿主细胞焦亡。

神经退行性疾病：研究小胶质细胞焦亡在神经炎症中的作用。

心血管药理实验：评价心肌缺血再灌注损伤中的焦亡通路。

毒理学安全性测试：检测环境毒素引发的组织特异性焦亡。

基因功能研究：验证焦亡相关基因敲除/过表达表型。

干细胞治疗评估：监测移植干细胞体内存活状态。

疫苗佐剂开发：分析免疫激活剂引发的抗原递呈细胞焦亡。

纳米材料生物相容性：评估新型材料对免疫细胞的焦亡诱导效应。

器官移植研究：检测移植物排斥反应中的细胞焦亡水平。

检测标准

依据ISO10993-5:2009医疗器械细胞毒性评价规范

GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价体外细胞毒性试验

参照ASTMF2944-12细胞活性标准化测量指南

采用国际细胞死亡命名委员会(ICSDN)焦亡判定共识

遵循WHO细胞因子检测标准化方案TRS932

依据ICHS6(R1)生物技术药物安全性评价指导原则

参考欧洲药典2.6.27细胞培养检测方法

GB/T39786-2021细胞培养检测通用要求

检测仪器

多激光流式细胞仪：配置405/488/640nm激光器，实现八色荧光同步检测功能。

高通量细胞成像系统：自动捕获细胞形态变化图像，具备实时动态追踪能力。

全波长酶标仪：支持双荧光波长同步扫描，精确测量ATP含量及酶活性。

激光共聚焦显微镜：配备活细胞工作站，进行亚细胞结构三维成像分析。

细胞电生理记录系统：监测细胞膜电容变化，量化膜穿孔动力学过程。

超灵敏化学发光检测仪：检测低丰度炎症因子，动态范围覆盖pg/mL级浓度。