支原体项目检测

检测项目

支原体培养检测：采用专用培养基如Hayflick's培养基，培养时间7-14天，灵敏度达10 CFU/mL，检测活菌存在。

PCR检测：利用聚合酶链反应扩增16S rRNA基因片段，检出限为1-10拷贝/μL，特异性>95%。

DNA染色检测：使用Hoechst 33258染料，荧光显微镜观察，灵敏度50 CFU/mL，适用于细胞培养污染筛查。

免疫荧光检测：基于支原体表面抗原，标记荧光抗体，检出限20 CFU/mL，时间30分钟。

ELISA检测：酶联免疫吸附法检测支原体抗体，灵敏度0.1 ng/mL，重复性CV<5%。

核酸杂交检测：采用特异性探针如PNA probes，检出限5拷贝/反应，适用于多重检测。

生化测试：检测支原体代谢特性如葡萄糖发酵，灵敏度100 CFU/mL，时间24小时。

血清学检测：利用动物血清进行凝集试验，检出限50 CFU/mL，用于种类鉴定。

细胞培养污染检测：监测细胞病变效应，灵敏度10 CFU/mL，耗时3-7天。

定量PCR检测：实时荧光定量扩增，动态范围10^1-10^8拷贝/μL，精度±0.5 log。

支原体种类鉴定：通过测序分析如16S rRNA，分辨率至种水平，准确率>99%。

抗生素敏感性测试：测定MIC值，范围0.01-256 μg/mL，报告敏感/耐药状态。

支原体活力检测：使用活/死染色如SYTO9/PI，灵敏度20 CFU/mL，区分活菌。

支原体负荷定量：基于qPCR标准曲线，单位CFU/mL或拷贝数，线性R^2>0.98。

支原体清除验证：在生物反应器中监测，检出限5 CFU/mL，确保无菌状态。

检测范围

生物制药产品：包括疫苗、单克隆抗体和治疗蛋白，检测支原体污染以保障无菌性。

细胞培养物：如哺乳动物细胞系和干细胞培养，筛查污染避免实验误差和产品失效。

临床样本：包括血液、组织和体液，用于诊断支原体感染如肺炎。

医疗器械：如植入物和导管，检测表面残留支原体确保生物相容性。

食品和饮料：包括乳制品和果汁，监控加工过程防止支原体污染引发变质。

环境样品：如空气和水源，评估微生物负荷以维护洁净环境。

化妆品和个人护理品：包括乳液和精华液，检测防腐剂失效导致的支原体滋生。

动物饲料：如饲料添加剂，确保无支原体污染保护动物健康。

研究试剂：包括血清和培养基，验证纯度支持可靠实验结果。

生物制品原材料：如牛血清和酶制剂，检测源头污染控制产品质量。

发酵产物：如抗生素和酶发酵液，监测发酵过程防止支原体干扰。

组织工程材料：如支架和生物墨水，确保植入前无支原体残留风险。

诊断试剂盒：包括ELISA和PCR kits，质量控制检测灵敏度和特异性。

疫苗佐剂：如铝盐和脂质体，检测支原体污染避免免疫反应异常。

细胞治疗产品：如CAR-T细胞，严格筛查确保患者安全性和疗效。

检测标准

ISO 17025:2017：检测实验室通用要求，涵盖支原体检测方法验证。

GB/T 4789.15-2003：食品微生物学检测支原体方法，规定培养和PCR步骤。

ASTM E2783-11：支原体检测标准指南，适用于生物制药环境。

USP <63>：药典支原体检测标准，强制用于药品无菌性验证。

EP 2.6.7：欧洲药典支原体检测规范，包括培养和分子方法。

ISO 21528-1:2017：微生物检测通用原则，支原体部分强调灵敏度控制。

GB 4789.26-2016：食品中支原体检测，详细描述样品处理和报告。

ISO 11737-1:2018：医疗器械灭菌微生物方法，整合支原体检测要求。

JP XVIII：日本药典支原体检测标准，涵盖培养和PCR技术。

GB/T 16292-2010：医药工业洁净室支原体监测规范。

ISO 11133:2014：培养基质量控制，支持支原体培养检测。

ASTM F3127-15：细胞治疗产品支原体检测指南。

GB/T 19973.1-2015：生物制品支原体检测方法，引用PCR和培养。

ISO 13408-1:2011：无菌工艺支原体控制标准。

USP <1223>：验证支原体检测方法，确保可靠性和重现性。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：用于扩增和定量支原体DNA，灵敏度达1拷贝/μL，支持多通道检测。

生物安全柜：提供Class II无菌环境，进行样品处理和培养，防止交叉污染。

荧光显微镜：观察DNA染色或免疫荧光信号，放大倍率1000x，用于支原体形态识别。

微孔板阅读器：执行ELISA检测，波长范围400-700 nm，自动读取吸光度值。

核酸提取仪：纯化支原体DNA/RNA，效率>90%，减少人为误差。

恒温培养箱：维持37°C恒温培养支原体，温度控制精度±0.5°C。

离心机：用于样品浓缩和沉淀，转速范围100-15000 rpm，支持微量样本。

凝胶成像系统：分析PCR产物电泳，分辨率5 μg DNA，确认扩增特异性。

自动化液体处理工作站：精确移液和混合试剂，通量96孔板，提高检测效率。

生物反应器监测系统：实时跟踪支原体负荷，集成pH和DO传感器，用于清除验证。