纳豆激酶圆二色光谱分析检测

检测项目

二级结构定量分析：测定α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规卷曲含量，精度±0.5%

热变性温度（Tm值）：记录222nm波长处椭圆度随温度变化拐点，范围20-95℃

等温构象稳定性：固定温度下监测椭圆度随时间衰减速率，时长0-24h

变性剂耐受性：观测尿素梯度（0-8M）中222nm谱带偏移

pH依赖性构象变化：扫描pH3-10区间190-260nm椭圆度响应

特征峰位确认：识别208nm、222nm双负峰及198nm正峰位置偏移

摩尔椭圆度计算：[θ]值换算采用精确分子量及光程参数

复性过程监测：追踪变性剂移除后特征谱带恢复动力学

金属离子效应：检测Ca²⁺/Zn²⁺（0-10mM）对209-222nm负峰影响

辅因子结合分析：测定ATP/NADH存在时208-240nm差谱变化

氧化修饰监测：对比二硫键形成前后222nm/208nm峰比值变化

冻融稳定性：循环冻融后190-260nm全谱带重复性分析

检测范围

纳豆激酶原料药：发酵提取物纯度验证及批间一致性比对

肠溶微胶囊制剂：包衣工艺对酶构象完整性影响评估

复合功能食品：基质干扰下活性构象保持率测定

固定化酶载体：载体结合前后二级结构变化分析

突变体构效研究：点突变引起的β-折叠含量定量比较

仿制药一致性评价：与原研药特征CD谱叠加度分析

冷冻干燥保护剂筛选：冻干过程α-螺旋损失率检测

酶储存稳定性：加速试验中208nm/222nm峰高比变化监测

金属蛋白酶杂质：识别215-225nm区特征β-结构谱带

药用辅料相容性：表面活性剂存在时热变性曲线偏移分析

生物反应器监控：发酵液中酶构象实时变化追踪

纳米递送系统：脂质体包裹后208nm峰位蓝移检测

检测标准

ASTM E2193-23 蛋白质溶液圆二色性测量标准指南

ISO 20998-3:2022 生物制药表征中圆二色光谱应用规范

GB/T 39133-2020 蛋白质二级结构含量测定 圆二色光谱法

JP XVII 通则2.24 酶制剂构象分析测试法

ChP 2020 通则0412 圆二色光谱测定法

ICH Q6B 生物技术产品质量表征要求

USP <1046> 细胞与基因治疗产品表征方法

ISO 10993-18:2020 医疗器械生物材料构象评估

GB/T 40154-2021 生物制品热稳定性试验指南

AOAC 2021.09 功能性蛋白质构象活性检测法

检测仪器

J-1500圆二色光谱仪：配备Peltier温控系统（±0.1℃），实现190-260nm区二级结构定量解析，支持变性剂梯度扫描

Chirascan Plus高灵敏光谱系统：配备双单色器及光弹性调制器，噪声水平<0.1mdeg，专用于弱信号酶溶液检测

MOS-500多通道检测模块：同步采集圆二色性/荧光/光散射信号，分析聚集态构象变化

PDA-1光电二极管阵列：实现毫秒级快速扫描，捕获酶折叠瞬时中间态

TC125温控样品池：温度精度±0.01℃，支持-10℃至130℃变性曲线测定

MicroCuvette超微量样品池：最低检测体积5μl，适用珍贵突变体研究

Stopped-Flow快速混合附件：毫秒级时间分辨CD检测折叠动力学

DEM模块：高精度二向色性测量，验证β-折叠周期性结构

CDtoolX数据处理系统：采用SVD算法分解重叠谱带，定量微量结构组分

氙灯光源稳定系统：输出波长稳定性±0.05nm，保障长时间扫描重复性