细胞sirna转染检测

检测项目

转染效率测定：使用流式细胞术定量GFP报告基因阳性细胞比例，检测灵敏度达0.1%

siRNA浓度验证：紫外分光光度法测定260nm吸光度，精度±2ng/μL

细胞活力检测：CCK-8法测定细胞存活率，线性范围10^3-10^6 cells/mL

转染复合物粒径分析：动态光散射仪测量纳米颗粒Z-Average直径，分辨率0.1nm

zeta电位检测：电泳光散射法测定转染载体表面电荷，范围±50mV

靶基因mRNA表达量：qRT-PCR定量Ct值差异，检测下限10 copies/μL

蛋白表达抑制率：Western Blot灰度分析，定量精度±5%

脱靶效应筛查：全基因组微阵列检测差异表达基因，覆盖>20000个基因位点

内毒素含量检测：鲎试剂法测定LPS残留，检测限0.001EU/mL

细胞凋亡率分析：Annexin V/PI双染法测定早期与晚期凋亡细胞比例

检测范围

哺乳动物细胞系：HEK293、HeLa等贴壁细胞转染效率验证

原代细胞：神经元、干细胞等难转染细胞的功能性递送评估

基因功能研究：肿瘤相关基因沉默效果的定量分析

药物筛选模型：基于siRNA的靶点验证实验体系构建

纳米载体开发：脂质体/聚合物载体的包封率与释放动力学测试

病毒载体对照：慢病毒/shRNA系统的平行效能比对

临床前研究：治疗性siRNA制剂的体外安全性评价

三维细胞模型：类器官与球状体的转染渗透深度检测

共转染体系：多siRNA组合的干扰协同效应分析

稳定性测试：siRNA在血清中的半衰期测定

检测标准

ISO 10993-5:2009医疗器械生物评价第5部分：体外细胞毒性试验

ASTM E2526-22纳米颗粒zeta电位测量标准指南

GB/T 38792-2020 基因表达定量检测 qRT-PCR法

ISO 22412:2017粒度分析 动态光散射法

USP<85>细菌内毒素测试规范

CLSI EP17-A2临床实验室检测下限建立指南

ICH Q2(R1)分析方法验证技术要求

GB/T 34818-2017 流式细胞术检测规范

ISO 17025:2017检测实验室通用要求

EMA/CAT/80183/2014基因治疗产品非临床研究指南

检测仪器

BD FACSCelesta流式细胞仪：配置405/488/640nm三激光系统，支持多色荧光检测

NanoBrook Omni动态光散射仪：粒径测量范围0.3nm-10μm，温度控制±0.1℃

Applied Biosystems QuantStudio 6 qPCR仪：支持384孔板高通量检测，温控精度±0.1℃

Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞仪：检测灵敏度达FITC<100 MESF

Olympus IX83荧光显微镜：配备60×油镜和sCMOS相机，成像分辨率1600×1200

Thermo NanoDrop One紫外分光光度计：样品需求量0.5-2μL，检测范围2-27000ng/μL

Agilent BioTek Synergy H1酶标仪：支持吸光度、荧光与化学发光多模式检测

Malvern Zetasizer Pro：zeta电位测量精度±0.1mV，电场强度0-200V/cm可调

Bio-Rad ChemiDoc MP成像系统：CCD像素达6.5百万，线性动态范围4.8OD

Eppendorf Centrifuge 5430R：最大转速15000rpm，温控范围-10℃至40℃