eb病毒dna测定检测

检测项目

EBV DNA定性检测：确定病毒存在与否，检测限1 copy/reaction，阴性对照验证率99.9%。

EBV DNA定量检测：测量病毒载量，范围10^2-10^8 IU/mL，线性相关系数R²>0.99。

EBV基因分型分析：区分1型与2型病毒株，位点覆盖BALF5基因区域，分辨率±1bp。

EBV耐药突变检测：筛查TK基因突变（如Lys459Arg），灵敏度≤1%突变频率。

EBV拷贝数变异测试：评估病毒整合位点，扩增效率90-110%，检出限10 copies/cell。

EBV潜伏期基因表达检测：定量EBNA1/2转录水平，动态范围10^3-10^7 copies/μg RNA。

EBV DNA稳定性评估：模拟样本储存条件（-80°C至25°C），降解率<5%/年。

EBV检测灵敏度验证：使用标准品（如NIBSC 09/162），检测限确认至5 copies/μL。

EBV特异性交叉反应测试：排除CMV/HHV-6干扰，特异性>98%，使用多重引物设计。

EBV检测重现性验证：批内与批间变异系数CV<5%，重复次数n=20。

EBV DNA提取效率分析：回收率≥95%，基于磁珠法参数。

EBV序列同源性研究：比对参考基因组（NC_007605），覆盖度>99%，错误率<0.1%。

检测范围

血清样本：急性感染诊断，如传染性单核细胞增多症监测，病毒载量动态评估。

血浆样本：治疗反应监测，适用于抗病毒药物疗效追踪。

脑脊液样本：中枢神经系统感染诊断，针对EBV相关脑炎检测。

外周血单核细胞：潜伏感染研究，用于移植后淋巴细胞增殖性疾病筛查。

组织活检样本：肿瘤相关性分析，如鼻咽癌或淋巴瘤组织DNA提取。

骨髓样本：造血干细胞移植监测，评估GVHD风险。

鼻咽分泌物样本：慢性疲劳综合征研究，非侵入性采样方法。

泪液样本：眼部并发症诊断，如葡萄膜炎相关EBV检测。

尿液样本：流行病学调查，低成本筛查应用。

唾液样本：大规模人群监测，居家自采样可行性验证。

福尔马林固定石蜡包埋组织：存档样本回顾性研究，脱蜡处理优化。

细胞培养上清：体外病毒复制模型，用于抗病毒药物筛选。

检测标准

ISO 15189:2012 医学实验室质量和能力要求，涵盖分子诊断全过程管理。

GB/T 29791-2013 体外诊断试剂性能评价，涉及灵敏度与特异性验证。

CLSI MM03-A2 定量分子检测方法指南，规定标准曲线与报告单位。

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力通用要求，确保设备校准合规。

GB/T 34796-2017 病毒核酸检测通用要求，包括样本前处理与质控。

ASTM E2888-19 核酸扩增标准实施规程，优化PCR反应条件。

ISO 20395:2018 分子体外诊断试剂性能评估，聚焦检测限确认。

GB/T 37864-2019 生物样本库标准，应用于保存样本检测。

EN ISO 13485:2016 医疗器械质量管理，覆盖试剂生产规范。

GB/T 20468-2006 临床实验室定量测定指南，确保结果可追溯性。

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：执行EBV DNA扩增与定量，温度精度±0.1°C，通道数≥6。

数字PCR系统：实现绝对病毒载量测定，分区数目20,000，灵敏度0.1 copies/μL。

核酸自动提取仪：处理样本DNA纯化，通量96样本/次，回收率≥95%。

高通量测序仪：用于EBV基因组分析，读长2x150bp，错误率<0.1%。

凝胶电泳系统：验证PCR产物大小，电压范围50-150V，分辨率±5bp。

荧光显微镜：辅助细胞学样本观察，放大倍数1000x，检测荧光标记探针。

生物安全柜：保障样本操作安全，气流速度0.5m/s，符合BSL-2标准。

恒温振荡器：用于细胞裂解步骤，温度范围4-100°C，转速50-300rpm。

微量分光光度计：测定DNA浓度，吸光度比值A260/A280≥1.8。

低温离心机：样本预处理分离，最大转速15,000rpm，温度控制-10°C至40°C。