高通量荧光定量pcr检测

检测项目

扩增效率测定：评估PCR反应效能，要求效率值90%-110%，R²≥0.99

荧光阈值设定：依据基线标准差自动计算，波动范围控制在3-15个循环

熔解曲线分析：检测产物特异性，升温速率0.05℃/秒，分辨率0.5℃

标准曲线建立：5点梯度稀释，线性范围跨越6个数量级

检测限验证：重复测定20次，检出概率≥95%

精密度测试：批内CV≤5%，批间CV≤10%

交叉反应评估：针对同源序列进行特异性验证

抑制剂耐受测试：添加10%血浆样本仍有效扩增

多通道检测：同步检测4-6种荧光染料，通道间干扰≤3%

动态范围确认：定量线性范围10¹-10⁷拷贝/μL

检测范围

病原微生物检测：细菌/病毒/真菌的核酸定性定量分析

基因表达分析：mRNA转录水平绝对定量

转基因成分鉴定：转基因作物外源基因检测

肿瘤标志物筛查：EGFR/KRAS等基因突变检测

药物代谢研究：CYP450酶系基因分型

食品安全监测：食源性致病菌快速筛查

遗传病诊断：囊性纤维化基因突变分析

环境微生物检测：水体/土壤微生物群落定量

法医物证分析：STR位点分型及定量

疫苗效价评估：病毒载体拷贝数测定

检测标准

ISO/IEC 17025:2017 检测和校准实验室能力要求

GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范

YY/T 1182-2010 核酸扩增检测试剂盒

CLSI MM17-A 分子诊断方法验证指南

ISO 20395:2019 生物样本核酸定量要求

GB/T 37871-2019 核酸检测试剂盒质量评价

EP17-A2 临床实验室检测限指南

ISO 22174:2005 食源病原体PCR检测通则

GB/T 34796-2017 核酸提取纯化试剂盒

MIQE指南：实时荧光定量PCR实验规范

检测仪器

实时荧光定量PCR仪：配置多波长光学模块，支持96/384孔板同步检测，温度均一性±0.3℃

自动核酸提取仪：磁珠法纯化技术，通量1-96样本/批次，回收率≥85%

微量分光光度计：检测范围2-7500ng/μL，分辨率0.1ng/μL，A260/A280比值判定纯度

自动化液体处理系统：移液精度CV≤2%，支持反应体系自动构建

超低温离心机：温控范围-20℃至40℃，最大RCF 30,000×g

生物安全柜：H14级高效过滤，维持ISO 5级洁净环境

超纯水系统：产水电阻率18.2MΩ·cm，TOC≤5ppb

数字PCR系统：微滴生成与分析模块，绝对定量精度±5%

恒温金属浴：控温范围4-100℃，温度稳定性±0.5℃

电泳成像系统：紫外/蓝光双激发，灵敏度0.1ng DNA