植物抗病性诱导分析检测

检测项目

苯丙氨酸解氨酶活性：关键防御酶，催化苯丙烷途径第一步反应。测定波长290nm，单位U/mg prot。反映木质素/植保素合成能力。

过氧化物酶活性：催化活性氧清除与细胞壁强化。测定愈创木酚法，波长470nm。单位ΔOD470/min/mg prot。指示活性氧代谢强度。

多酚氧化酶活性：参与酚类物质氧化聚合。检测邻苯二酚法，波长420nm。单位ΔOD420/min/mg prot。关联抗病黑化反应。

几丁质酶活性：降解病原真菌细胞壁。荧光底物4-MU-(GlcNAc)₃法，激发365nm/发射450nm。单位nmol MU/min/mg prot。量化抗真菌能力。

β-1,3-葡聚糖酶活性：水解病原卵菌葡聚糖。还原糖法测定，波长540nm。单位μmol Glc/min/mg prot。评估抗卵菌活性水平。

病程相关蛋白表达量：PR-1、PR-2、PR-5等标志蛋白。采用ELISA或Western Blot技术。检测限0.1ng/mL。表征系统获得抗性激活状态。

水杨酸含量：核心防御信号分子。HPLC-MS/MS定量，C18色谱柱，负离子模式MRM检测。定量限0.5ng/g FW。监测系统抗性信号传导。

茉莉酸含量：创伤响应信号介质。UPLC-ESI-MS/MS分析，多反应监测模式。定量限0.3ng/g FW。评估诱导抗性信号强度。

木质素沉积量：细胞壁加固标志。乙酰溴法比色测定，波长280nm。单位mg/g DW。量化物理屏障形成程度。

植保素累积量：抗菌次生代谢物。LC-MS/MS靶向定量，保留时间±0.1min。覆盖辣椒素、紫檀芪等32种化合物。单位μg/g DW。

活性氧爆发强度：H₂O₂与O₂˙⁻动态监测。DAB染色组织化学定位或荧光探针DCFH-DA法。激发488nm/发射525nm。单位RFU/min/mg prot。

胼胝质沉积检测：β-1,3-葡聚糖可视化。苯胺蓝荧光染色，激发405nm/发射485nm。显微图像分析沉积面积百分比。

防御基因表达谱：NPR1、PAL、LOX等基因转录水平。qRT-PCR检测，SYBR Green法。引物效率90-110%，熔解曲线单峰。相对表达量2^-ΔΔCt计算。

检测范围

粮食作物：水稻白叶枯病抗性诱导、小麦赤霉病系统抗性、玉米大斑病免疫反应评估等。检测叶片防御酶谱变化及穗部毒素积累抑制率。

经济作物：棉花黄萎病诱导抗性、大豆疫霉根腐抗性、油菜菌核病生物诱导剂评价等。分析根系分泌物成分与维管束木质化程度。

蔬菜作物：番茄晚疫病抗性诱导、黄瓜霜霉病系统抗性激活、辣椒疫病免疫信号传导等。量化果实采后抗病相关基因表达量。

果树类：苹果轮纹病诱导抗性、柑橘溃疡病系统获得抗性、葡萄霜霉病防御反应等。检测果皮角质层厚度及果肉植保素含量。

药用植物：三七根腐病生物防治诱导、铁皮石斛软腐病抗性提升、枸杞白粉病免疫激活等。测定药用部位次生代谢物增量。

林木资源：杨树溃疡病诱导抗性、松树萎蔫病系统抗性、桉树青枯病免疫应答等。分析木质部导管侵填体形成密度。

花卉植物：月季黑斑病生物诱导、菊花枯萎病抗性增强、兰花软腐病防御机制等。检测花瓣超微结构变化及抗菌蛋白表达。

组培苗体系：马铃薯脱毒苗晚疫病抗性诱导、香蕉组培苗枯萎病免疫激活等。量化微环境ROS信号传导效率。

转基因材料：抗病基因过表达植株的防御反应强度、RNAi沉默植株的诱导抗性缺陷等。验证基因功能与信号通路完整性。

生物诱导剂：壳聚糖、寡糖素、蛋白激发子、益生菌制剂等处理效果评估。测定持效期及防御信号网络激活广度。

检测标准

ISO 16634: 植物材料中总氮含量测定 - 杜马斯燃烧法，支撑防御蛋白定量分析

GB/T 3543.5-1995：农作物种子抗病虫性检测准则，规范离体叶片接种试验流程

GB/T 35810-2018：林业植物及其产品抗病性检测规程，规定林木病害分级标准

NY/T 1859-2010：番茄抗病性鉴定技术规程，明确晚疫病病情指数计算公式

ISO 21479: 植物样品中微量元素ICP-MS测定标准，保障信号分子检测准确性

GB/T 5009.124-2016：食品中氨基酸测定方法，适用于病程相关蛋白组分分析

GB/T 28719-2012：植物源性产品中水杨酸测定 高效液相色谱法，定量限0.05mg/kg

ISO 11885: 水质-电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)，用于抗病相关矿质元素检测

GB/T 38163-2019：植物中过氧化物酶活性测定 分光光度法，规定愈创木酚反应体系

GB/T 19495.4-2018：转基因植物及其产品检测 实时荧光PCR方法，验证抗病基因表达

ISO 21571: 分子生物学检测核酸提取规范，确保防御基因RT-qPCR数据可靠性

AOAC 999.03: 植物产品中β-葡聚糖酶测定方法，适用于诱导抗性酶活评估

检测仪器

多功能酶标仪：波长范围200-1000nm，支持紫外/可见/荧光检测。用于防御酶动力学测定（POD、PAL等）及微孔板法植保素定量，检测通量96孔/次。

高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：色谱分离精度±0.05min，质量精度1ppm。实现水杨酸、茉莉酸等信号分子及32种植保素的同步靶向定量，检出限达pg级。

实时荧光定量PCR仪：温度均一性±0.2℃，灵敏度达10拷贝/μL。检测PR蛋白编码基因、防御通路关键转录因子（如WRKY、NPR1）的动态表达，熔解曲线分析确保特异性。

激光共聚焦显微镜：分辨率0.2μm，Z轴步进精度0.1μm。进行胼胝质沉积三维重构、H₂O₂荧光探针原位定位及病原侵染过程实时观测，配备405/488/561/640nm激光器。

全自动化学发光成像系统：像素密度6.5μm，动态范围4.8OD。完成防御蛋白Western Blot精确定量及病害症状面积百分比计算，支持化学发光与多色荧光检测。

冷冻高速离心机：最大离心力100,000×g，温控范围-20℃至40℃。用于细胞器分离获取质外体液、膜蛋白提取及酶活性测定样品制备，保障亚细胞组分完整性。

植物光合-荧光仪：PAR测量0-3000μmol·m⁻²·s⁻¹，叶绿素荧光采样频率10μs。量化抗病诱导过程中的光系统损伤程度及光合电子传递链状态，评估能量分配策略。

超微量分光光度计：样品体积0.3μL，光程0.02mm。进行微量RNA/DNA浓度测定及纯度分析（A260/A280），确保基因表达实验起始材料质量合格。