植物病原菌抗性分析试验

检测项目

病原菌分离纯化：采用梯度稀释法获得单菌落，菌株纯度≥99%

孢子悬浮液制备：血球计数板校准浓度1×10⁵~1×10⁷ spores/mL

离体叶片接种试验：创伤接种直径5mm叶片区域，温度25±1℃

病斑面积定量分析：ImageJ软件测量褐变区域，精度±0.1mm²

侵染率动态监测：每24小时记录菌丝扩展速率，误差≤5%

抗性相关酶活性检测：过氧化物酶(POD)活性单位U/mg·min

胼胝质沉积观察：苯胺蓝荧光染色，激光共聚焦显微镜400×成像

抗病基因表达量检测：RT-qPCR扩增，内参基因Ct值偏差≤0.5

木质素含量测定：乙酰溴法，检测限100μg/g

系统获得抗性(SAR)诱导：水杨酸(SA)梯度浓度0.1~1.0mM

细胞过敏性反应(HR)评估：台盼蓝染色计数坏死细胞比例

抗菌物质提取鉴定：HPLC-MS分析酚类物质保留时间±0.2min

检测范围

粮食作物种质资源：水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)抗性筛选

经济林苗木：松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)侵染防御评估

设施农业栽培基质：腐霉病(Pythium spp.)生物抑制效能验证

转基因作物品系：CRISPR/Cas9编辑抗病基因功能验证

中药材种植材料：白术根腐病(Fusarium oxysporum)抗性分级

园林观赏植物：月季黑斑病(Diplocarpon rosae)抗性育种材料

果蔬采后保鲜材料：柑橘青霉病(Penicillium digitatum)抑制试验

生物农药制剂：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)抑菌圈直径测定

抗病诱导剂研发：壳聚糖处理浓度50~200μg/mL梯度测试

植物疫苗有效性：病毒外壳蛋白(CP)激发免疫应答时效分析

林木抗逆品种：杨树溃疡病(Botryosphaeria dothidea)野外抗性监测

种子处理药剂：种衣剂对小麦赤霉病(Fusarium graminearum)防效测试

检测标准

ISO 22036:2020 植物材料病原菌接种操作规范

GB/T 3543.5-2022 农作物种子抗病性鉴定技术规程

ASTM D8412-21 离体叶片病原菌侵染定量评估指南

EPPO PP 1/280(2) 林木溃疡病抗性分级标准

NY/T 1248.7-2021 转基因植物抗病性评价技术规范

ISO 16140-6:2021 抗菌物质体外抑菌效能验证方法

GB/T 38582-2020 植物抗病基因实时荧光定量PCR检测

ISTA 7-21 种子健康检验中病原菌抗性测试规程

FAO/IPGRI 植物遗传资源抗病性评价指南

GB/T 36838-2018 农药田间药效试验抗性监测准则

检测仪器

全自动灭菌培养箱：维持25±0.5℃恒温环境，湿度波动≤3%RH

激光共聚焦显微镜：实现胼胝质沉积累进动态400×原位观察

高通量病原接种仪：精准控制接种量10μL±0.5μL/样本

实时荧光定量PCR仪：抗病基因表达量检测灵敏度达1pg/μL

植物表型成像系统：自动捕获病斑扩展图像，分辨率5μm/pixel

超高效液相色谱仪：抗菌物质分离检测保留时间偏差±0.05min

酶标仪：抗性相关酶活性批量检测，波长精度±1nm

人工气候室：模拟昼夜温差10~15℃波动环境胁迫

冷冻切片机：制作10μm厚度植物组织病理切片

生物安全柜：提供ISO Class 3级病原操作防护环境