植物抗病性评估实验

检测项目

病原菌接种试验：采用喷雾/针刺法接种，孢悬液浓度1×10⁶~5×10⁶ CFU/mL，记录病斑扩展直径（精度±0.1mm）

过敏性反应（HR）检测：测量坏死斑出现时间（0.1h精度）及面积占比（图像分析精度±2%）

病程相关蛋白分析：定量PR-1/PR-5蛋白含量，ELISA检测限0.1ng/mL

木质素沉积测定：采用硫代酸解法，测量波长280nm，精度±5μg/g

活性氧爆发监测：DAB染色法检测H₂O₂累积量，分光光度计测量波长460nm

防御酶活性检测：POD酶活单位定义（ΔOD₄₇₀/min·mg prot），PAL酶活测定范围1~300U/L

水杨酸含量测定：HPLC-MS/MS法，色谱柱C18，检出限0.05μg/g

抗病基因表达量：RT-qPCR检测，引物Tm值58±1℃，Ct值检测范围10~35

气孔关闭响应速率：显微观测法，统计100μm²内气孔开度变化（精度±0.5μm）

系统获得抗性（SAR）评估：挑战接种后病斑抑制率计算（±2%误差）

植保素累积量：LC-MS检测紫檀素等次生代谢物，保留时间偏差≤0.1min

细胞壁加厚观测：半薄切片染色法，厚度测量精度±0.5μm

检测范围

粮食作物：水稻稻瘟病抗性鉴定（Oryza sativa-Pyricularia oryzae互作体系）

经济作物：棉花黄萎病抗性评价（Gossypium spp.-Verticillium dahliae模型）

蔬菜类：番茄晚疫病抗性分级（Solanum lycopersicum-Phytophthora infestans）

果树类：柑橘溃疡病抗性筛选（Citrus spp.-Xanthomonas axonopodis pv. citri）

林木资源：杨树锈病抗性监测（Populus spp.-Melampsora larici-populina）

观赏植物：月季黑斑病抗性评价（Rosa hybrida-Diplocarpon rosae）

药用植物：三七根腐病抗性检测（Panax notoginseng-Fusarium solani）

转基因材料：抗病毒基因沉默效率验证（病毒接种后症状分级标准）

种质资源库：小麦赤霉病抗性种质筛查（Triticum aestivum-Fusarium graminearum）

组培苗体系：马铃薯脱毒苗晚疫病抗性复壮评价

生态修复植物：湿地植物锈病抗性筛选（Phragmites australis-Puccinia phragmitis）

野生近缘种：野生大豆疫霉根腐病抗源挖掘（Glycine soja-Phytophthora sojae）

检测标准

GB/T 3543.4-1995 农作物种子抗病虫性检验规范

ISO 22030:2005 土壤质量-生物学方法-高等植物慢性毒性试验

ASTM E2399-05 植物病害严重度标准图谱使用指南

NY/T 1443.1-2007 农作物抗病虫性鉴定技术规范 稻瘟病

GB/T 17980.22-2000 农药田间药效试验准则 杀菌剂防治番茄晚疫病

EPPO PP 1/135(4) 植物病害抗性评估方案制定指南

NY/T 3083-2017 植物抗病性鉴定技术规程 玉米南方锈病

ISO 16198:2015 植物保护产品-植物毒性评估方法

GB/T 28068-2011 转基因植物及其产品抗病虫性检测指南

ISTA 7-015 种子健康检验-小麦赤霉病菌检测规程

检测仪器

无菌接种操作台：ClassⅡA2型生物安全柜，维持0.45m/s进气流速，保障病原定量接种

植物表型成像系统：配备VIS/NIR高光谱相机（波长范围400-1000nm），自动分析病斑形态特征

实时荧光定量PCR仪：支持96孔快速温控（±0.3℃精度），检测抗病基因相对表达量

激光共聚焦显微镜：配备405/488/561nm三激光器，观测病原菌侵染过程及胼胝质沉积

高通量酶标仪：具备UV/Vis双光路（波长范围200-1000nm），同步检测96样本酶活性

超高效液相色谱-质谱联用仪：ESI离子源，分辨率70000FWHM，定量防御代谢物

气孔观测系统：配备微分干涉镜头（DIC），最小分辨率0.1μm，记录气孔运动轨迹

植物培养气候箱：光强可调范围0-3000lux，温控精度±0.5℃，模拟病害发生环境

冷冻切片机：-35℃温控样品台，制备8μm厚度组织切片用于病理学观察

叶绿素荧光成像仪：Fo/Fm参数检测精度±0.005，量化病原胁迫下光合损伤程度