松球果锈病菌检测

检测项目

病原菌形态特征鉴定、孢子萌发率测定、菌丝生长速率分析、rDNA-ITS序列比对、β-tubulin基因扩增、细胞壁降解酶活性检测、过氧化物酶同工酶谱分析、线粒体基因组测序、寄主范围测定、侵染阈值确定、抗铜制剂敏感性试验、温度适应性测试、湿度响应曲线建立、孢子扩散距离模型构建、针叶渗透压耐受性评估、细胞膜透性变化监测、抗氧化酶系统活性测定、次生代谢产物毒性分析、超微结构电镜观察、分子标记开发验证、群体遗传多样性分析、实时侵染进程跟踪、交叉接种致病性验证、潜伏期持续时间测定、病害严重度分级标准建立、气候因子关联模型构建、杀菌剂残留量检测、土壤带菌量定量分析、空气孢子浓度动态监测、木质部定殖能力评估

检测范围

马尾松针叶病斑样本、油松球果鳞片组织、华山松枝条溃疡病灶、红松幼苗茎基部渗出液、湿地松树脂结晶物、白皮松树皮裂纹菌膜体、云南松林地表凋落物、黄山松冠层气传孢子样本、樟子松嫁接接口愈伤组织、火炬松伐桩腐朽木质部、雪松移植苗根系分泌物、落叶松人工林土壤剖面样本、五针松芽鳞越冬菌丝体混悬液、赤松林间空气孢子捕捉片辐射松种子表面附着物混悬液混交林边缘带气溶胶样本苗圃灌溉水沉淀物城市绿化带修剪残枝堆肥体古树名木年轮切片标本进口木材检疫样品实验室保存菌株斜面林区气象站露水凝结样自然保护区鸟类羽毛携带物松脂加工原料半成品伐木工具表面擦拭样疫区边界隔离带缓冲样本组培苗污染源追踪样无人机航拍热成像异常区取样遥感监测疑似病灶核心样

检测方法

1.形态学鉴定法：采用体视显微镜观察冬孢子堆着生位置及形态特征，配合扫描电镜分析孢子表面纹饰结构
2.实时荧光定量PCR：基于EF-1α基因设计特异性引物探针，建立绝对定量标准曲线测定病原载量
3.ELISA血清学检测：制备多克隆抗体建立双抗体夹心法，快速筛查大批量样品带菌情况
4.孢子捕捉计数法：使用转子式孢子捕捉器连续采集气传孢子，经卡尔科诺尔染色后统计单位体积浓度
5.离体接种试验：在人工气候箱内模拟昼夜温差条件进行离体针叶穿刺接种，记录病斑扩展速率
6.代谢组学分析：运用UPLC-QTOF-MS技术比较健康与染病组织差异代谢物，筛选特征性生物标志物
7.抗药性突变位点检测：通过HRM熔解曲线分析CYP51基因单核苷酸多态性位点
8.三维建模监测法：采用激光扫描仪构建树冠病害分布立体模型，量化空间传播规律

检测标准

GB/T31785-2015林木病原真菌分离培养技术规范
SN/T5418-2022进出口松属植物检疫鉴定方法
LY/T3271-2021林业有害生物分子检测通则
ISO17075:2017植物检疫-分子生物学检测实验室能力要求
GB/T35343-2017林木病害调查监测技术规程
EPPOPM7/129(1)锈菌目病原分子诊断标准流程
NY/T3969-2021农用杀菌剂抗性风险评估指南
DB35/T2086-2022松树锈病综合防控技术规程
GB/T40161-2021林木种苗检疫技术规程
ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力通用要求

检测仪器

1.全自动显微成像系统：配备微分干涉模块和图像拼接软件，实现孢子形态参数批量测量
2.梯度PCR仪：搭载热盖压紧技术保障温度均一性，满足多重PCR反应程序需求
3.超高效液相色谱质谱联用仪：采用BEHC18色谱柱分离次生代谢产物，质量精度达1ppm
4.激光共聚焦扫描显微镜：运用荧光标记技术动态观测菌丝侵染过程细胞壁变化
5.高通量测序平台：基于NovaSeq6000系统完成全基因组重测序及转录组分析
6.智能人工气候箱：可编程控制光照强度/温湿度/CO2浓度等多参数组合条件
7.便携式孢子捕捉器：集成GPS定位和无线传输功能实现野外实时监测数据回传
8.X射线断层扫描仪：非破坏性检测树干内部菌丝扩展路径及维管束堵塞程度