检测项目
病毒粒子形态观察、外壳蛋白电泳分析、核酸提取纯度测定、RT-PCR扩增效率验证、实时荧光定量Ct值判定、DAS-ELISA抗体效价测定、免疫胶体金试纸条灵敏度测试、病毒分离培养成功率统计、寄主植物接种试验反应分级、种子带毒率抽样检验、蚜虫传毒能力评估、土壤残留病毒灭活效果验证、温度梯度稳定性试验、离心沉淀物电镜扫描、核酸探针杂交特异性测试、WesternBlot蛋白印迹分析、基因组测序完整性评估、单克隆抗体交叉反应试验、病斑面积测量统计系统误差校准、样本保存液渗透压适配性测试、研磨缓冲液pH值优化验证、引物二聚体干扰排除实验、内参基因表达稳定性验证、移液器精度校准核查、阳性对照品灭活处理确认试验、核酸浓度标准曲线线性回归分析、扩增产物熔解曲线峰型判别、生物安全柜气流流速监测记录检测范围
马铃薯块茎表皮组织切片样本、新生叶脉显微取样标本、茎秆维管束横切面样本组培苗离体叶片匀浆液沉淀物种子表面消毒残留液离心上清液蚜虫口针提取物土壤浸出液过滤浓缩物农用器械表面擦拭棉签样本包装材料吸附残留物灌溉水样浓缩沉淀物仓储环境空气采样膜片加工设备刮取物有机肥腐熟度测试样本邻近作物交叉感染对照样本实验室培养基污染监测样本运输车辆厢体拭子样本防护服表面静电吸附物冷冻保存种质资源复苏液样本刀具切割面残留物雨水径流收集样本花粉传播媒介捕捉器样本昆虫消化道内容物提取液农机轮胎附着泥土样本嫁接刀具消毒效果验证样本检测方法
1.双抗体夹心ELISA法：采用单克隆抗体包被微孔板捕获病毒颗粒，酶标二抗显色定量分析2.巢式RT-PCR技术：通过两轮特异性引物扩增提高马铃薯V病毒RNA检出灵敏度3.负染电镜观察法：2%磷钨酸染色处理样本后观察直径700-750nm的线状病毒粒子4.实时荧光定量PCR：基于TaqMan探针系统建立copies/μL绝对定量标准曲线5.免疫磁珠富集法：使用偶联抗体的磁性微粒实现低浓度样本中病毒颗粒的快速浓缩6.双向电泳技术：分离病毒外壳蛋白并进行MALDI-TOF质谱鉴定7.微滴数字PCR：通过数万次微反应单元分区实现无需标准品的绝对定量分析8.胶体金免疫层析法：利用纳米金标记抗体实现田间快速初筛的侧向层析技术9.超速离心密度梯度法：采用20-40%蔗糖梯度分离提纯完整病毒颗粒10.原位杂交技术：使用地高辛标记探针定位叶片组织内病毒RNA分布检测标准
GB/T36813-2018植物检疫马铃薯V病毒检疫鉴定方法SN/T5359-2021进出境种苗中马铃薯V病毒实时荧光RT-PCR检测规程ISO16106:2020马铃薯病毒诊断规程—分子生物学方法EPPOPM7/145(1)马铃薯V病毒诊断协议NY/T401-2020农作物种子产地检疫规程GB/T3543.5-2021农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定ISO17075:2017植物病害诊断实验室能力验证指南GB/T19495.5-2018转基因植物及其产品成分检测抽样和制样方法SN/T2123-2022进出境植物繁殖材料检疫处理准则AS5011.15-2020食品微生物学检验植物病原体检测通则检测仪器
1.实时荧光PCR仪：配备FAM/HEX双通道光学系统用于多重核酸检测2.超速离心机：最大转速150,000g可完成病毒颗粒梯度纯化3.全自动酶标仪：具备450nm/630nm双波长读取功能的高通量ELISA分析设备4.冷冻切片机：-25℃低温环境制备完整植物组织超薄切片5.透射电子显微镜：配备CCD相机的200kV高分辨成像系统6.生物分子相互作用分析仪：表面等离子共振技术测定抗体亲和力常数7.超微量分光光度计：0.5μL样本量实现A260/A280纯度比值测定8.恒温金属浴：精确控温0.1℃保障核酸扩增反应均一性9.全自动核酸提取工作站：磁珠法96通道并行处理样本的标准化平台10.凝胶成像系统：配备365nm紫外透射光源的化学发光信号采集装置
