病原微生物核酸检测

检测项目

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）、甲型流感病毒H1N1/H3N2/H5N1/H7N9/H9N2亚型、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A/B型、腺病毒B/E型、鼻病毒A/B/C型、副流感病毒1-4型、肠道病毒EV71/CA16型、诺如病毒GI/GII型、轮状病毒A组、结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌（NTM）、肺炎支原体/衣原体/军团菌、百日咳杆菌、白喉棒状杆菌、脑膜炎奈瑟菌A/B/C/Y/W135群、金黄色葡萄球菌mecA基因、耐万古霉素肠球菌（VRE）、艰难梭菌毒素B基因、产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）、沙门氏菌invA基因、李斯特菌hly基因、弯曲菌mapA基因、白色念珠菌18SrRNA、烟曲霉ITS区、新型隐球菌CAP64基因、疟原虫18SrRNA、利什曼原虫kDNA。

检测范围

咽拭子/鼻咽拭子/肺泡灌洗液/痰液/血液/血清/血浆/脑脊液/胸腹水/关节液/尿液/粪便/肛拭子/阴道分泌物/前列腺液/胆汁/骨髓穿刺液/组织活检样本/食品样本（肉类制品/乳制品/水产品/即食果蔬）/饮用水源水/污水样本/医疗环境物表拭子/空气沉降样本/医疗器械冲洗液/化妆品原料及成品/药品原料药/疫苗中间品/实验动物脏器组织/病媒生物（蚊虫/蜱类）标本。

检测方法

实时荧光定量PCR（qPCR）：基于TaqMan探针或SYBRGreen染料法实现核酸扩增与定量分析的双重功能。
数字PCR（dPCR）：通过微滴分割实现绝对定量检测，适用于低载量样本和复杂基质分析。
多重PCR：单管同步扩增多个靶标基因的复合检测体系。
逆转录PCR（RT-PCR）：针对RNA病毒的核酸扩增前处理技术。
环介导等温扩增（LAMP）：恒温条件下实现核酸指数级扩增的快速筛查方法。
微流控芯片技术：集成核酸提取与扩增的自动化微型检测平台。
基因测序：包括Sanger测序用于耐药基因分型及二代测序（NGS）用于未知病原体鉴定。
CRISPR-Cas系统：基于特异性核酸酶活性的新型分子诊断技术。
微阵列芯片：高通量并行检测多种病原体特征性基因片段。
数字微滴培养联用PCR：前置富集步骤提升活菌检出灵敏度。

检测标准

GB/T37837-2019生物样品中微生物病原体核酸检测通则
WS/T683-2020新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南
ISO15216-1:2017食物链微生物学-甲型肝炎病毒和诺如病毒实时RT-PCR检测方法
GB4789.40-2016食品安全国家标准克罗诺杆菌检验
YY/T1717-2020核酸扩增法检测试剂盒通用技术要求
SN/T2775-2011国境口岸冠状病毒核酸检测方法
WS/T497-2017侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南
ISO22174:2005食物链微生物学-食源性病原体PCR检测通用要求及定义
GB/T34781-2017猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法
WS/T805-2022临床微生物检验核酸测序质量控制

检测仪器

全自动核酸提取仪：采用磁珠法或离心柱法实现批量样本核酸纯化。
实时荧光定量PCR仪：配备多通道光学系统支持多重靶标同步检测。
数字PCR分析系统：通过微滴生成与流式检测完成绝对定量分析。
高通量测序平台：IlluminaNovaSeq6000/IonTorrentS5系列实现大规模平行测序。
恒温扩增分析仪：专用于LAMP/RPA等等温扩增技术的便携式设备。
生物芯片阅读仪：用于微阵列芯片信号采集与数据分析。
超低温离心机：保障核酸样本制备过程中的生物大分子完整性。
生物安全柜：提供BSL-2级防护的核酸提取操作空间。
超微量分光光度计：测定DNA/RNA浓度及纯度（A260/A280比值）。
电泳成像系统：验证PCR产物片段大小及特异性。