高致病禽流感诊断办法检测

检测项目

病毒分离鉴定、RT-PCR核酸检测、实时荧光定量PCR、基因测序分析、血凝抑制试验（HI）、神经氨酸酶抑制试验（NI）、琼脂扩散试验（AGP）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光染色（IFA）、胶体金试纸条快速检测、病毒中和试验（VNT）、病理组织学检查、电镜观察、病毒载量测定、亚型分型检测（H5/H7/H9）、抗原变异分析、宿主特异性鉴定、跨种传播风险评估、耐药基因筛查、环境样本病毒监测、疫苗株鉴别诊断、抗体效价测定、细胞病变效应观察、鸡胚接种试验、红细胞凝集特性测试、分子进化树构建、单克隆抗体分型、免疫组化染色、生物信息学分析、气溶胶病毒检测。

检测范围

活体禽类咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清样本、全血样本、组织匀浆液（肝/脾/肾/肺/脑）、粪便样本、卵黄膜样本、胚胎尿囊液、冷冻肉制品提取物、饲料添加剂样品、饮用水样本、养殖场空气滤膜样本、运输车辆表面拭子、屠宰设备冲洗液样本、羽绒制品原料羽毛样本、禽类疫苗原液样本、实验动物肺组织切片样本、冷冻精液样本、孵化场绒毛样本、野鸟迁徙路线土壤样本、候鸟栖息地水体样本、冷链运输包装材料表面拭子、禽类加工副产品样本（血粉/羽毛粉）、实验室传代细胞培养物样本（MDCK/DF-1）、实验感染动物鼻腔冲洗液样本。

检测方法

病毒分离法：采用9-11日龄SPF鸡胚尿囊腔接种法进行病毒增殖培养，通过血凝试验初筛阳性样本。

实时荧光RT-PCR：针对HA基因保守区设计TaqMan探针体系，设置内参基因对照排除抑制剂干扰。

二代测序技术：使用Illumina平台完成全基因组测序分析抗原位点突变与基因重配特征。

微量中和试验：在生物安全柜内用固定病毒-稀释血清法测定中和抗体效价。

免疫层析试纸法：基于金标纳米颗粒标记单克隆抗体的侧向层析快速筛查技术。

透射电镜观察：经磷钨酸负染处理观察典型球形病毒粒子表面纤突结构。

焦磷酸测序法：对HA裂解位点进行高精度碱基序列测定判断毒力强弱。

数字PCR技术：采用微滴式分区扩增实现绝对定量分析低载量样本。

检测标准

GB/T18936-2020高致病性禽流感诊断技术规范

SN/T1182.1-2021禽流感检疫技术规范第1部分：病毒分离与鉴定

OIETerrestrialManual2023Chapter3.3.4Avianinfluenza

NY/T772-2022禽流感病毒RT-PCR检测方法

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

ISO/IEC17025:2017检测和校准实验室能力通用要求

WS/T563-2017流感样病例暴发疫情处置指南

GB/T35911-2018实验动物微生物学等级及监测

NY/T4066-2021禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法

GB/T38505-2020实验动物福利伦理审查指南

检测仪器

全自动核酸提取仪：采用磁珠法完成高通量样本核酸纯化作业流程。

三级生物安全柜：提供ISOClass5洁净环境保障活毒操作安全性。

荧光定量PCR仪：配置多通道光学系统实现熔解曲线分析与阈值循环数计算。

超高速离心机：配备气密性转头完成高浓度病毒颗粒富集操作。

全自动酶标仪：支持双波长比色法完成96孔板ELISA结果判读。

冷冻切片机：保持-20℃低温环境制作组织病理学观察标本。

数字PCR系统：通过微流体芯片实现单分子级别核酸绝对定量。

负压隔离器：集成HEPA过滤系统用于感染动物实验操作防护。

超低温冰箱：提供-86℃储存环境保障病毒毒种长期稳定性。

激光共聚焦显微镜：配合荧光标记抗体进行病毒定位观察分析。