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RNA浓度测定:通过吸光度法或荧光法量化RNA总量,参数包括测量范围1 ng/μl~2000 ng/μl,精度±5%
RNA纯度评估:基于A260/A280和A260/A230比率分析杂质,参数标准为1.8~2.0和2.0~2.2,偏差容忍度0.1
RNA完整性检测:使用RIN值评估降解程度,参数范围为1~10(10为完整),分辨率0.1单位
rRNA残留量测定:定量样品中rRNA占比,参数包括检出限0.1%,准确性±1%
mRNA富集效率:针对polyA捕获方法评估富集率,参数目标值95%以上,波动范围±3%
适配体连接效率:在文库制备中检测连接成功率,参数标准连接率≥90%,阈值精度2%
测序深度分析:计算平均覆盖度,参数设定如30x标准深度,允许误差±5%
基因表达量化:采用FPKM或TPM值衡量表达水平,参数分辨率0.01单位,动态范围10^6倍
差异表达筛选:基于p值和fold change阈值识别差异基因,参数p<0.05,fold change≥2
可变剪接事件检测:统计剪接变异百分比,参数检出灵敏度0.01%,计数误差±1事件
GC含量验证:评估序列GC分布均匀性,参数范围30%~70%,偏差容忍度5%
文库复杂度分析:测量独特分子数占比,参数目标值≥70%,精度±3%
批次效应校正:监测实验批次间变异性,参数RSD≤5%,用于标准化处理
人体血液样本:全血或血浆来源RNA,适用于临床诊断和研究
动物组织样本:如肿瘤或器官组织RNA,用于病理机制分析
植物材料样本:叶片或根系RNA,应用于农业遗传改良
微生物培养物样本:细菌或真菌RNA,服务于环境微生物研究
细胞系培养物样本:体外培养细胞RNA,用于药效筛选实验
病毒RNA样本:包括RNA病毒提取物,支持流行病学监控
法医鉴定样本:如毛发或体液RNA,应用于身份识别分析
环境样本:土壤或水体中RNA,服务于生态多样性评估
药物研发样本:药物处理细胞RNA,用于毒性及响应研究
食品源样本:农产品RNA,应用于转基因检测
考古样品:古生物RNA残留,用于进化生物学重建
合成RNA标准品:人工合成RNA序列,用于质量控制
海洋生物样本:如藻类RNA,支持海洋资源开发
ISO 20395:2020规范分子体外诊断检测质量要求
GB/T 34797-2017规定基因测序技术操作流程
ASTM E2056标准用于分子生物学实验验证
ISO 17025实验室能力通用准则
GB/T 30988高通量测序数据格式标准
ISO 15189医学实验室质量管理体系
ASTM E3130 RNA提取方法性能评估
GB/T 35530生物样本库RNA保存规范
ISO 10993医疗器械生物相容性测试相关要求
GB/T 38165基因表达分析数据报告指南
ASTM F2026体外诊断试剂验证标准
ISO 13485质量管理体系医疗设备应用
高通量测序系统:如Illumina NovaSeq,用于大规模并行测序,覆盖深度控制
生物分析仪:如Agilent Bioanalyzer,评估RNA完整性和大小分布,RIN值计算
分光光度计:如NanoDrop One,测量RNA浓度和纯度,A260/A280比率分析
荧光定量仪:如Qubit Fluorometer,高灵敏度RNA定量,检出限0.1 ng/μl
PCR扩增系统:如Thermo Fisher Veriti,执行文库扩增步骤,温度控制精度±0.1°C
自动化工作站:如Beckman Coulter Biomek,处理样本制备,减少人为误差
凝胶电泳系统:如Bio-Rad Gel Doc,可视化RNA质量,分辨率达100 bp