脂肪单细胞测序检测

检测项目

单细胞捕获效率：检测细胞分离成功率，捕获率参数≥85%，确保最小细胞损失。

RNA完整性检测：评估RNA质量，RIN值参数≥7.0，防止降解影响测序。

文库浓度测定：使用荧光法量化，浓度范围10-100 ng/μl，保证文库构建质量。

测序深度控制：确保每细胞平均reads数≥50,000，参数用于覆盖基因表达。

比对率分析：reads比对到参考基因组比例≥90%，参数验证数据准确性。

UMI复杂度：Unique Molecular Identifier计数，UMI count参数>5000 per cell，检测文库多样性。

基因检出数：每细胞检测基因数目标≥2000，参数评估表达广度。

细胞活性验证：活细胞比例≥90%，参数确保样本活力。

批次效应校正：使用统计方法降低批次差异，如ComBat算法，参数FDR<0.05。

聚类质量评估：轮廓系数参数≥0.5，评价细胞亚群分离效果。

差异表达分析：筛选显著基因，FDR参数<0.05，确保生物学意义。

细胞类型注释准确性：与标记基因一致性≥95%，参数验证注释可靠性。

测序错误率控制：碱基错误率参数<0.1%，保障数据置信度。

文库大小分布：检测片段大小范围200-700 bp，参数优化测序效率。

线粒体基因比例：控制比例参数<20%，减少细胞应激影响。

检测范围

皮下脂肪组织样本：研究白色和棕色脂肪细胞亚型差异，用于肥胖机制分析。

内脏脂肪活检样本：分析腹部脂肪炎症状态，应用于代谢综合征研究。

脂肪干细胞（ASC）培养物：监控分化过程基因表达，支持再生医学应用。

肥胖患者临床样本：探究疾病相关细胞异质性，助力精准医疗干预。

糖尿病模型动物脂肪：评估胰岛素抵抗关联，用于药效测试。

减肥手术前后对比样本：监测脂肪组织变化，评价治疗效果。

老化相关脂肪萎缩样本：分析年龄依赖性基因表达，用于抗衰老研究。

癌症恶病质脂肪损失样本：研究肿瘤微环境影响，支持癌症治疗优化。

胚胎脂肪发育样本：探索发育过程中细胞分化，应用于发育生物学。

脂肪组织工程材料：评估工程化脂肪功能，用于再生植入物验证。

药物毒性测试样本：检测新型化合物对脂肪细胞影响，支持安全评估。

营养干预研究样本：分析饮食调整后基因表达变化，用于健康管理。

遗传性疾病脂肪样本：探究基因突变效应，应用于诊断研究。

炎症性疾病脂肪活检：识别炎症标志物，支持免疫疗法开发。

检测标准

ISO 20391-1:2018 细胞计数和活力测定标准，规范细胞捕获流程。

GB/T 34796-2017 单细胞RNA测序技术要求，定义文库构建和数据分析。

ASTM E3134-19 基因表达谱分析方法，指导差异表达验证。

ISO/IEC 17025:2017 测试和校准实验室能力要求，确保质量控制体系。

GB/T 27407-2010 实验室质量控制规范，覆盖样本处理和检测环境。

EN ISO 15189:2012 医学实验室质量和能力要求，适用于临床样本检测。

ISO 11133:2014 微生物学质量控制，防止样本污染影响。

GB/T 37864-2019 生物样本库管理规范，规范样本存储和运输。

ISO 5725-2:2019 测量方法与结果准确度评估，用于数据重复性验证。

ASTM E1488-12 核酸测序质量保证指南，优化测序参数设置。

ISO 10993-18:2020 医疗器械生物学评价，支持脂肪工程材料检测。

GB/T 37837-2019 高通量测序数据分析规范，指导生物信息学流程。

检测仪器

10x Genomics Chromium System：单细胞捕获平台，用于高效细胞分离和文库制备，功能包括微流控技术实现高捕获率。

Illumina NextSeq 550：中通量测序仪，进行单细胞RNA测序，功能支持快速数据生成和深度控制。

Agilent 2100 Bioanalyzer：芯片电泳系统，检测RNA完整性和文库大小分布，功能确保样本质量。

Thermo Fisher Qubit Fluorometer：荧光定量仪，测量DNA/RNA浓度，功能提供精确文库构建参数。

BD FACSAria Fusion：流式细胞仪，用于细胞分选和活性验证，功能纯化活细胞样本。

Qiagen QIAcube：自动化核酸提取仪，处理样本RNA提取，功能提高实验效率。

NanoDrop One：紫外分光光度计，快速检测核酸浓度，功能辅助质量控制。

Fluidigm C1：单细胞捕获系统，实现自动捕获和扩增，功能优化低样本量应用。