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基因工程验证检测体系包含以下核心项目:
载体构建验证:确认重组载体的酶切位点正确性及插入片段完整性
基因编辑效率测定:通过测序分析CRISPR/Cas9等工具介导的靶向修饰成功率
拷贝数定量:采用qPCR技术测定转基因生物中外源基因的整合拷贝数
表达产物分析:包括mRNA转录水平检测及蛋白质表达量测定
脱靶效应筛查:通过全基因组测序或特异性探针检测非预期编辑事件
遗传稳定性评估:连续传代培养中目标性状的保持能力测试
功能活性验证:通过体外细胞模型或动物模型验证基因产物的生物学效应
本检测体系适用于以下研究对象:
样本类型 | 具体对象 |
---|---|
原核系统 | 重组质粒、工程菌株等 |
真核系统 | 转基因细胞系、重组病毒载体等 |
模式生物 | 基因编辑小鼠、斑马鱼等模式动物 |
植物样本 | 转基因作物组织及再生植株 |
临床样本 | 基因治疗产品的中间体及终产品 |
覆盖领域包括生物医药研发、农业遗传改良、工业微生物改造及基础科学研究等多个方向。
主要采用以下标准化检测技术:
Sanger测序法
T载体克隆验证测序精度达99.99%以上
双向测序覆盖全长插入片段
数字PCR技术
灵敏度可达单拷贝级别检测
消除标准曲线带来的系统误差
Western Blotting
SDS-PAGE电泳分辨率达10 kDa差异区分
化学发光法检测限低至pg级蛋白量
全基因组测序(WGS)
30×测序深度覆盖99%基因组区域
SNP/InDel检测灵敏度达0.1%突变频率
流式细胞术
多色荧光标记同时检测6种以上参数
细胞分选纯度可达99%以上
关键设备配置如下:
仪器类别 | 具体型号示例 | 核心参数指标 |
---|---|---|
核酸分析系统 | Thermo NanoDrop OneC | 紫外吸收光谱260/280比值1.8-2.0 |
测序平台 | ABI 3500xL Genetic Analyzer | 毛细管电泳分辨率1 bp差异区分 |
蛋白质分析系统 | Waters Xevo TQ-S micro | MRM模式检测限1 fmol/μL |
细胞分析平台 | Millipore Guava Muse | 微毛细管技术样本量需求<100 μL |
环境控制系统 | Eppendorf BioFlo Pro 3100 | 四通道独立气体调控系统(O₂/CO₂/N₂/Air) |
确定测试对象与安排:确认测试对象并进行初步检查,确定样品寄送或上门采样安排;
制定验证实验方案:与委托方确认与协商实验方案,验证实验方案的可行性和有效性;
签署委托书:签署委托书,明确测试详情,确定费用,并按约定支付;
进行实验测试:按实验方案进行试验测试,记录数据,并进行必要的控制和调整;
数据分析与报告:分析试验数据,并进行归纳,撰写并审核测试报告,出具符合要求的测试报告,并及时反馈测试结果给委托方。