酚氯仿提取rna检测

检测项目

RNA浓度测定：使用紫外分光光度法在260nm波长测量，范围0.1-5000 ng/μl，灵敏度±0.05 ng/μl

A260/A280比值：评估蛋白质污染，理想值1.8-2.0，偏差>0.2表示污染风险

A260/A230比值：检测有机溶剂或盐类残留，合格值>1.8，检出限0.05单位

RNA完整性数（RIN）：基于电泳图谱算法计算，范围1-10，数值<7表示显著降解

28S/18S rRNA比值：评估完整性，正常值约2:1，偏差±0.5指示退化

DNase处理残留检测：验证DNA污染清除，使用PCR方法，检出限<0.1% DNA残留

RT-PCR效率测试：测量Ct值变化，效率范围90-110%，用于功能性验证

冻融稳定性分析：重复冻融次数测试（0-10次），降解率<10%为合格

储存稳定性评估：在不同温度（-80°C, -20°C, 4°C）下保质期测定，保质期>12个月

微生物污染检测：无菌培养检查，检测细菌、真菌生长，阴性为标准

pH值测定：评估提取缓冲液残留，范围6.5-8.0，偏差±0.5

离液剂残留分析：如胍盐检测，使用色谱法，检出限<0.01 μg/ml

RNA大小分布：通过电泳或芯片分析，检测片段大小（100-10000 nt）

氧化损伤检测：测量8-氧鸟嘌呤水平，使用HPLC方法，检出限0.1 pmol/μg RNA

酶活性残留测试：验证RNase抑制剂效率，活性<0.001 U/ml

检测范围

动物组织样本：包括小鼠肝脏、大鼠心脏等器官组织，用于基因表达研究

植物样本：如水稻叶片、小麦根茎，适用于转基因作物分析

细胞培养物：哺乳动物细胞系（如HEK293）、原代细胞，用于体外实验RNA提取

血液样本：全血、血浆或白细胞，应用于临床诊断和血液病研究

微生物样品：细菌、酵母或病毒颗粒，支持病原体检测和微生物组学

临床样本：肿瘤组织活检、体液标本，用于癌症分子诊断

环境样本：土壤、水样中微生物群落RNA，适用于环境监测

食品样本：肉类、蔬菜中病原体RNA，用于食品安全检测

法医样本：毛发、唾液或精液，应用于个体鉴定和法医分析

药物研发样本：细胞治疗中RNA质量控制，支持新药开发

农业生物技术样本：转基因作物种子或叶片，用于监管合规测试

海洋生物学样本：浮游生物或珊瑚RNA，支持海洋生态研究

昆虫样本：果蝇或蚊子组织，应用于遗传学和疾病模型

古生物样本：化石或古DNA提取残留RNA，用于进化生物学

生物制药中间体：细胞培养上清液RNA，用于生产过程监控

检测标准

ISO 21571:2005 食品和饲料中转基因生物检测核酸提取方法

GB/T 34796-2017 RNA提取和检测通用技术要求

ASTM E2694-16 核酸定量标准试验方法

ISO 20395:2018 生物技术-RNA完整性评估规范

GB/T 19495.2-2004 转基因产品检测核酸提取部分

CLSI MM13-A RNA检测质量指南

DIN EN ISO 22174 分子生物学检测通用要求

ISO 17025:2017 检测和校准实验室能力通用要求

GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范分子生物学检测

EPA Method 1623 水样病原体RNA检测标准

ISO 15189:2012 医学实验室质量和能力要求

GB/T 35823-2018 植物RNA提取检测方法

AOAC Official Method 2012.25 食品中RNA检测规程

检测仪器

NanoDrop分光光度计：测量RNA浓度和A260/A280、A260/A230比值，提供快速紫外吸收分析

Agilent Bioanalyzer：通过微流体电泳评估RNA完整性、RIN值和大小分布

Qubit荧光计：使用高灵敏度染料法定量RNA浓度，范围0.1-1000 ng/μl

PCR仪：支持RT-PCR检测RNA功能性，温度精度±0.1°C，用于Ct值测量

凝胶电泳系统：可视化RNA条带完整性，包括28S/18S rRNA比值分析

离心机：用于样本沉淀和纯化步骤，转速范围100-20000 rpm

分光光度计：传统UV-Vis仪器测量吸光度，波长精度±1 nm

冷冻干燥机：处理样本储存前脱水，温度控制-50°C至30°C

色谱仪：检测离液剂残留，如HPLC系统，检出限0.01 μg/ml

微孔板读数器：高通量RNA浓度测定，支持96孔或384孔格式