植物抗病性分子检测

检测项目

RT-qPCR检测病原相关基因表达：测量植物防御基因如PR1的表达水平，检测灵敏度达1拷贝/反应，定量范围100-10⁷拷贝/μL

ELISA检测抗病蛋白：分析病程相关蛋白如几丁质酶，检测限0.05 ng/mL，适用浓度范围0.1-500 ng/mL

Western blotting分析蛋白质丰度：定量关键抗病因子如R蛋白，分辨率低至5 ng，使用SDS-PAGE分离

DNA测序鉴定抗病基因突变：通过全基因组测序或靶向测序，覆盖深度30x以上，准确率99.9%

SNP分型分析遗传标记：筛查抗病相关单核苷酸多态性，分型精度98%，样本通量96孔板

Microarray基因表达谱分析：检测数千基因同时表达，阵列密度10,000点/cm²，动态范围10⁴

RNA-seq转录组分析：全转录本测序，序列读长150 bp，误差率0.1%，覆盖度95%

Protein-protein interaction检测：验证抗病通路互作，亲和力常数测定范围10⁻⁹-10⁻¹² M

Histochemical staining观察抗病反应：可视化细胞壁加厚或胼胝质沉积，染色灵敏度0.5 μm分辨率

Flow cytometry细胞表面标记检测：量化免疫细胞响应，检测速度10,000细胞/秒，精度±2%

CRISPR-Cas9基因编辑验证：靶向编辑抗病基因，编辑效率80%-95%，脱靶率低于0.1%

代谢组学分析抗病代谢物：鉴定水杨酸或茉莉酸类物质，LC-MS检测限0.01 ppm，线性范围0.1-1000 μg/mL

ChIP-seq分析转录因子结合：定位抗病基因启动子区域，峰识别置信度p<0.05

荧光原位杂交定位基因表达：空间分辨细胞特异性表达，分辨率0.2 μm，信噪比15:1

免疫沉淀检测蛋白复合物：分离抗病相关复合物，回收率90%，特异性抗体结合

检测范围

主要粮食作物：水稻、小麦、玉米等，用于评估常见病害如稻瘟病或锈病的抗性遗传机制

蔬菜类作物：番茄、黄瓜、辣椒等，针对疫病或病毒病开展分子标记筛选

果树品种：苹果、柑橘、葡萄等，检测溃疡病或枯萎病的抗性基因表达

经济作物：棉花、油菜、甘蔗等，聚焦黄萎病或黑腐病的分子诊断

观赏植物：玫瑰、菊花、兰花等，评估白粉病或灰霉病的抗性响应

林木资源：松树、橡树、杉树等，用于松材线虫病或枯萎病的早期检测

药用植物：人参、黄芪、当归等，分析根腐病或叶斑病的分子抗性指标

转基因植物株系：工程改良的抗病品种，验证外源基因整合和表达稳定性

野生植物种质资源：收集多样性样本，鉴定抗病相关等位基因频率

园艺植物新品种：育种材料筛选，确保抗病性状的分子水平稳定性

种子抗病性鉴定：播种前样本，预测幼苗期病害抵抗能力

组织培养苗：无菌条件下检测，评估病毒或真菌感染的分子响应

植物病原互作研究：实验模型系统，模拟真实病害环境下的分子机制

抗病育种材料：杂交后代筛选，优化分子标记辅助选择效率

植物检疫样品：进出口检疫应用，快速识别高风险病原携带

检测标准

ISO 17025:2017测试和校准实验室能力要求，涵盖质量管理与技术规范

GB/T 19495转基因植物分子检测方法，规定PCR和测序流程

ASTM D5465环境DNA分析标准，适用于植物病原检测

ISO 24276食品和饲料中核酸检测，扩展至植物病害筛查

GB/T 5009食品安全国家标准，包含植物源性样本分子检测

ISO 20395分子生物学检测重复性要求，确保结果一致性

GB/T 34796核酸提取规范，标准操作步骤

ASTM E3060基因表达分析指南，适用于RT-qPCR技术

ISO 21571食品分子生物学方法，支持抗病基因检测

GB/T 3543种子检验规程，纳入分子层面病害评估

ISO 16140方法验证程序，强化检测可靠性

GB/T 28046植物检疫分子检测，针对国际贸易应用

ASTM D7788蛋白质检测标准，规范Western blotting操作

ISO 20166分子诊断质量控制，涵盖抗病性检测全过程

GB/T 30990植物转基因检测，规定抗病基因验证流程

检测仪器

PCR扩增仪：用于DNA或RNA模板扩增，支持基因表达和突变检测，温度控制精度±0.1°C

Real-time PCR系统：定量分析基因表达水平，荧光检测通道4个，动态范围10⁷

高通量测序仪：进行全基因组或转录组测序，通量每天100 Gb数据，读长150 bp

毛细管电泳系统：分离核酸片段，分辨率1 bp，适用于SNP分型和片段分析

生物分析仪：评估核酸和蛋白质质量，灵敏度0.1 ng/μL，自动化样本处理

荧光显微镜：观察细胞水平抗病反应，放大倍数1000x，配备CCD相机捕获图像

离心机：分离细胞组分，转速范围100-20,000 rpm，用于样本预处理

分光光度计：测量核酸浓度，波长范围190-1100 nm，精度±1%

微孔板读板机：高通量ELISA检测，检测速度96孔/30秒，波长可选性

流式细胞仪：分析细胞表面标记，流速设置灵活，数据采集速率10,000事件/秒

蛋白质纯化系统：分离抗病相关蛋白，层析柱容量1 mL-100 mL，回收率95%

恒温培养箱：样本孵育，温度控制±0.5°C，适用于细胞培养实验

凝胶成像系统：捕获电泳结果，分辨率20 μm，支持荧光和化学发光检测

自动化液体处理工作站：高通量样本制备，移液精度0.1 μL，减少人为误差

质谱仪：代谢物鉴定，质量精度1 ppm，用于抗病代谢组学分析