修饰酶特异性结合能力测定

检测项目

表面等离子体共振分析：通过监测生物分子结合前后折射率变化实时分析相互作用动力学，用于测定结合速率和解离速率常数。

等温滴定量热法：直接测量生物分子结合过程中释放或吸收的热量，提供结合焓变、熵变及化学计量比等热力学参数。

荧光偏振/各向异性测定：利用荧光标记分子结合前后偏振光变化评估旋转弛豫时间，间接反映分子大小变化及结合事件。

微量热泳动测定：基于分子在温度梯度场中迁移速率变化检测结合行为，适用于复杂样品体系且无需固定化处理。

圆二色谱分析：通过测量手性物质对左右圆偏振光吸收差异，分析酶与配体结合引起的构象变化。

核磁共振波谱分析：利用原子核自旋能级跃迁研究蛋白质-配体相互作用界面及动态结构信息。

动态光散射技术：通过检测溶液中颗粒布朗运动引起的散射光波动，评估复合物形成后的流体力学半径变化。

停流光谱技术：快速混合反应物并监测毫秒级动力学过程，适用于研究快速酶促反应初始阶段。

平衡透析法：利用半透膜分离游离与结合态配体，通过浓度测量直接计算结合常数。

凝胶迁移阻滞实验：观察蛋白质与核酸结合后电泳迁移率变化，定性或半定量分析DNA/RNA结合特性。

检测范围

甲基化酶与DNA底物：测定S-腺苷甲硫氨酸依赖性甲基转移酶对特定DNA序列的识别与催化效率。

乙酰化酶与组蛋白复合物：评估组蛋白乙酰转移酶对核小体核心组蛋白赖氨酸残基的结合特异性。

磷酸化酶与信号肽段：分析蛋白激酶对底物肽段中丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸位点的选择性磷酸化能力。

泛素化连接酶与靶蛋白：检测E3泛素连接酶对特定底物蛋白的识别机制及泛素链组装过程。

糖基化酶与糖受体:研究糖基转移酶对不同糖基供体及蛋白质/脂类受体的底物偏好性。

核酸剪切酶与修饰碱基:评估限制性内切酶对甲基化/羟甲基化等DNA修饰的敏感性变化。