核酸扩增灵敏性试验

检测项目

标准物质制备与定量：采用经确认的核酸标准物质，通过精密仪器进行绝对定量，作为灵敏度评价的基准。

系列稀释液制备：将定量后的标准品进行对数级梯度稀释，确保每个浓度梯度的准确性和可追溯性。

扩增反应体系建立：优化反应体系中引物、探针、酶和dNTPs等组分的浓度与比例，保证扩增效率。

扩增程序设置：设定包括预变性、变性、退火、延伸等步骤的温度和时间参数，确保特异性扩增。

检测下限确定：通过重复检测不同稀释浓度的样本，统计阳性检出率，以95%阳性检出率对应的浓度为检测下限。

精密度评估：对接近检测下限的浓度样本进行多次重复检测，计算变异系数，评估方法的重复性。

特异性验证：检验方法对非目标核酸序列或相近序列的区分能力，避免假阳性结果干扰灵敏度判断。

抑制物影响评估：在样本中添加常见抑制物，考察其对扩增效率的影响，确定方法的抗干扰能力。

数据分析与曲线拟合：利用软件对扩增曲线进行分析，计算循环阈值，建立标准曲线并评估线性范围与效率。

结果报告与不确定度评定:依据标准规范报告检测下限值，并对定值结果进行不确定度评估。