AAV载体功能验证试验

检测项目

物理滴度测定：通过实时荧光定量PCR或数字PCR技术，绝对定量单位体积病毒悬液中包含的病毒基因组拷贝数。该数据是评估病毒载体产量的基础参数。

感染滴度测定：利用表达绿色荧光蛋白或抗性基因的细胞系，评估病毒载体有效感染靶细胞并表达外源基因的能力。结果以感染单位每毫升表示。

空壳率分析：采用阴离子交换色谱或分析型超速离心法，区分具有完整基因组的完整病毒颗粒与不含基因组的空壳病毒颗粒的比例。

纯度分析：使用高效液相色谱或毛细管电泳等技术，检测病毒制剂中宿主细胞蛋白质、核酸等工艺相关杂质的残留水平。

颗粒完整性评估：通过电子显微镜观察病毒颗粒的形态结构完整性，确认其是否保持典型的二十面体结构且无聚集现象。

内毒素检测：应用鲎试剂凝胶法或动态显色法，定量检测病毒制备过程中可能引入的内毒素污染含量。

无菌检查依据药典方法进行微生物限度测试，确保最终产品无细菌、真菌等微生物污染。

复制型腺相关病毒检测:采用灵敏的细胞培养结合PCR方法，筛查因重组事件产生的具有自主复制能力的缺陷型病毒。

体外功能活性验证:在特定细胞模型中进行感染实验，通过Westernblot、ELISA或流式细胞术定量检测目的蛋白的表达水平和生物学功能。

体内效力评价:在合适的动物模型上给药，评估病毒载体在活体环境中的转基因表达持久性、组织特异性及预期治疗效果。

检测范围

临床级AAV制剂:适用于拟用于人体临床试验的高纯度、高滴度腺相关病毒载体产品的全面质量检定。

科研用AAV样品:针对实验室基础研究所需的病毒载体，提供关键的滴度、纯度和基本功能确认服务。

不同血清型AAV载体:涵盖AAV1,AAV2,AAV5,AAV6,AAV8,AAV9等多种常见血清型及其衍生变体的特性分析。

携带不同基因的AAV载体:验证携带报告基因、治疗性基因或调控元件的各种重组AAV载体的功能一致性。