荧光定量移液检测

检测项目

核酸绝对定量分析：通过构建标准曲线，对样品中特定DNA或RNA模板的起始拷贝数进行精确定量。

基因表达相对定量分析：比较不同处理组或不同时间点样本间目标基因的表达差异，通常以内参基因进行归一化。

单核苷酸多态性分型：利用特异性探针或高分辨率熔解曲线，鉴别样本中特定的单碱基差异。

病原体核酸检测：快速、灵敏地检测病毒、细菌等病原体的特异性核酸序列，用于感染诊断。

转基因成分鉴定：定性及定量检测食品、农产品中是否含有外源转基因成分及其含量。

microRNA表达谱分析：对微小的非编码RNA分子进行定量，研究其在基因调控及疾病中的作用。

甲基化水平检测：通过重亚硫酸盐处理等方法，定量分析特定基因启动子区域的DNA甲基化程度。

拷贝数变异分析：检测基因组特定区域拷贝数的增加或缺失，与多种遗传疾病相关。

细胞因子mRNA表达量检测：定量分析免疫细胞中各类细胞因子转录水平的变化。

药物靶点基因表达监控：在药物研发或治疗过程中，监测特定靶点基因的表达响应。

检测范围

临床诊断样本：包括血清、血浆、全血、尿液、痰液、组织切片等人体来源样本。

生命科学研究样本：涵盖细胞培养物、细菌菌液、动植物组织、总RNA、基因组DNA等。

食品安全监测样本：包括加工食品原材料、成品、饲料等中的微生物及转基因成分。

环境监测样本：如水体、土壤、空气颗粒物中特定微生物或病原体的核酸污染。

法医物证样本：对痕量DNA样本进行STR分析或性别鉴定等，要求极高的灵敏度。

病原体耐药性检测：检测病原体基因中与耐药性相关的突变位点。

肿瘤标志物检测：定量检测循环肿瘤DNA或与癌症相关的特异性基因突变及表达。

遗传病筛查样本：对羊水、绒毛膜等产前样本进行特定遗传病相关基因的检测。

疫苗质量监控：检测疫苗制品中核酸类成分的浓度与完整性。

基因编辑效果验证：精确量化经过CRISPR等工具编辑后的基因敲除或敲入效率。

检测方法

TaqMan探针法：使用序列特异性荧光探针，在PCR延伸阶段发生水解，释放荧光信号进行检测，特异性极高。

SYBR Green I染料法：利用能结合双链DNA的小分子染料发出荧光，成本较低，但需配合熔解曲线分析以确保特异性。

分子信标法：采用茎环结构的探针，仅在与靶序列完全配对时展开并发出荧光，背景信号低。

双重或多重荧光PCR：在同一反应体系中，使用不同荧光标记的探针同时检测多个靶标，提高通量。

数字PCR：将反应体系分割成数万个微单元进行独立PCR，通过计数阳性单元实现绝对定量，不依赖标准曲线。

高分辨率熔解曲线分析：通过监测升温过程中双链DNA解链时的荧光变化，鉴别序列差异，适用于SNP分型和突变扫描。

逆转录荧光定量PCR

等温扩增结合荧光检测：如环介导等温扩增技术，在恒定温度下扩增并实时监测荧光，便于现场快速检测。

微滴式数字PCR

绝对定量的标准曲线法

检测仪器设备

实时荧光定量PCR仪

数字PCR系统

自动化液体处理工作站

精密移液器

高速冷冻离心机

核酸蛋白浓度测定仪

生物安全柜/超净工作台

-80°C超低温冰箱

涡旋振荡器与掌上离心机

电泳系统或芯片分析仪

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