18s高通量测序检测

检测项目

DNA完整性检测：凝胶电泳法评估样本降解程度，要求28S/18S条带比值＞1.8

引物特异性验证：采用Blast比对分析引物覆盖度，确保覆盖95%以上真核生物门类

PCR扩增效率：qPCR检测Ct值范围18-25，扩增曲线R²≥0.99

文库浓度定量：Qubit荧光计检测范围0.1-100ng/μL，灵敏度0.05ng/μL

片段大小分布：Agilent 2100分析仪检测插入片段400-550bp

Cluster生成密度：Illumina平台控制120-140K/mm²

测序数据量控制：单样本≥50,000 clean reads，Q30≥85%

嵌合体过滤：UCHIME算法识别并移除＞2%嵌合序列

OTU聚类分析：97%相似度阈值划分操作分类单元

物种注释精度：Silva138数据库比对，LCA算法置信度≥0.8

α多样性分析：计算Shannon指数误差范围±0.15

β多样性比较：Bray-Curtis距离矩阵热图可视化

功能预测分析：PICRUSt2推断代谢通路丰度

检测范围

土壤微生物组：农田/森林土壤真核微生物群落结构解析

水体浮游生物：海洋/淡水生态系统中藻类及原生动物监测

临床病原检测：真菌性肺炎病原体（如曲霉菌）快速筛查

食品发酵微生物：酒曲/酵素中酵母菌群动态跟踪

生物制药原料：细胞培养体系支原体污染鉴定

环境毒性评估：污染物对底栖微生物多样性影响研究

法医物证分析：腐败样本中真核生物DNA溯源

养殖水体监测：水产病害相关寄生虫（如小瓜虫）预警

中药材鉴定：冬虫夏草等药用真菌真伪鉴别

极端环境微生物：地热泉嗜热真核微生物勘探

空气微生物组：室内环境真菌群落定量分析

考古样本研究：沉积物中古微生物群落重建

检测标准

ISO 20395-2019 生物技术-核酸定量方法验证要求

GB/T 38576-2020 人类粪便样本宏基因组检测规范

EPA-600-R-17-296 环境微生物组测序技术指南

ISO 20914-2019 医学实验室-测序数据质量要求

GB/T 34796-2017 高通量测序数据质量控制

MIxS v5.0 环境样本元数据采集规范

CLSI MM18-A2 微生物宏基因组检测标准

ISO 21749-2021 测量不确定度评定方法

GB/T 37850-2019 生物信息分析准确度验证

检测仪器

Nanodrop One紫外分光光度计：检测DNA纯度A260/A280比值1.8-2.0

Covaris M220聚焦超声破碎仪：控制DNA片段化至目标长度±10%

Illumina NovaSeq 6000测序系统：双端150bp测序通量6Tb/run

QIAcube HT核酸自动化提取仪：96孔板同步处理样本通量

Agilent 4200 TapeStation电泳系统：评估文库片段分布CV值＜5%

Biomek i7自动化工作站：PCR产物纯化回收率＞90%

Oxford Nanopore PromethION：长读长验证短读序列拼接准确性

Thermo QuantStudio 7实时荧光定量PCR仪：监控扩增效率R²＞0.998

Beckman Coulter Biomek NGeniuS：自动化文库构建防交叉污染设计