流式细胞术测细胞凋亡检测

检测项目

Annexin V结合检测：采用FITC标记探针定量磷脂酰丝氨酸外翻率，检测灵敏度达95%，早期凋亡特异性识别率>90%

线粒体膜电位检测：JC-1染料测定红/绿荧光比值，量化ΔΨm衰减程度，分辨率±5mV

Caspase酶活性检测：FLICA荧光底物标记活化Caspase-3/7，酶活性检测限0.5nM

DNA片段化分析：TUNEL法标记断裂DNA末端，阳性细胞检出阈值10^3细胞/ml

细胞膜通透性检测：PI染料渗透性测试，区分晚期凋亡与坏死细胞，浓度范围0.1-10μg/ml

活性氧检测：DCFH-DA探针定量胞内ROS水平，检测波长488/530nm

细胞周期分析：碘化丙啶染色测定亚G1峰比例，DNA含量检测精度CV<3%

死亡受体检测：CD95/Fas配体结合率测定，抗体标记效率≥98%

钙离子流检测：Fluo-3AM荧光探针监测胞内Ca²⁺浓度波动，动态范围50nM-5μM

凋亡蛋白定量：Bax/Bcl-2比率免疫荧光分析，蛋白表达量检测误差±3%

细胞尺寸检测：前向散射光分析细胞收缩程度，尺寸变化分辨率0.2μm

溶酶体稳定性：LysoTracker染色评估膜稳定性，荧光强度线性范围100-10000AU

检测范围

肿瘤药理研究：抗肿瘤药物诱导的癌细胞凋亡动力学分析

免疫细胞治疗：CAR-T细胞疗法中免疫效应细胞存活率监测

造血系统研究：骨髓干细胞分化过程中的程序性死亡评估

神经退行性疾病：阿尔茨海默病模型神经元凋亡通路研究

生殖医学应用：精子细胞质量与受精能力相关性检测

毒理学测试：环境污染物暴露导致的肝细胞毒性评估

心血管研究：心肌缺血再灌注损伤中的细胞死亡机制

皮肤组织工程：表皮细胞移植存活率定量分析

植物生理学：病原体侵染引发的植物细胞HR反应监测

疫苗开发：佐剂对免疫细胞激活/凋亡平衡的影响

微生物发酵：工程菌株稳定性与凋亡率关联分析

衰老机制研究：端粒缩短相关的细胞凋亡进程追踪

检测标准

ISO 10993-5:2009 医疗器械生物学评价-细胞毒性试验

GB/T 39730-2020 细胞凋亡检测通用技术要求

ASTM F2944-12 流式细胞术表征细胞凋亡标准方法

GB/T 35823-2018 干细胞检测中凋亡率测定规程

ISO 13022:2012 医疗产品细胞存活率测定方法

GB/T 40365-2021 细胞治疗产品凋亡检测规范

FDA Guidance for Industry: Immunogenicity Testing

EP 2.7.24 欧洲药典细胞活力检测专论

GB/T 16886.5-2017 医疗器械生物学评价-体外细胞毒性

ISO 19007:2018 纳米材料细胞毒性流式检测指南

检测仪器

流式细胞仪：配置488nm/640nm双激光系统，实现多参数同步检测，可同时获取10色荧光信号及散射光参数

细胞分选模块：高速静电滴分选装置，分选纯度>99%，支持单细胞分选用于后续分子验证

荧光微孔板读数仪：配备405-650nm滤光片组，支持96/384孔板高通量凋亡标志物初筛

活细胞成像系统：集成相位差与荧光成像，实现凋亡过程动态监测，时间分辨率达30帧/秒

全自动细胞计数器：双荧光通道凋亡细胞计数，检测通量>100样品/小时，CV值<5%

激光共聚焦显微镜：Z轴层扫分辨率0.5μm，用于亚细胞定位凋亡信号验证

微流控芯片分析平台：单细胞水平凋亡进程监测，细胞消耗量仅为常规检测1/100