流式测细胞焦亡检测

检测项目

Annexin V/PI双染分析：定量早期/晚期焦亡细胞比例，激发波长488nm，发射通道FL1(525nm)/FL3(670nm)

Caspase-1活性检测：使用FAM-YVAD-FMK荧光探针，检测灵敏度≥95%，孵育时间30min/37°C

GSDMD蛋白表达：抗人GSDMD单抗标记，克隆号EPR19829，同型对照IgG1κ

线粒体膜电位(ΔΨm)：JC-1染色比例测定，浓度梯度2.5-10μM，聚合态/单体荧光比阈值1.8

炎性小体组件检测：NLRP3抗体标记，交叉反应性验证≤0.1%，流式分辨率104颗粒/秒

活性氧(ROS)爆发：H2DCFDA荧光探针，浓度10μM，避光孵育20min

LDH释放率测定：波长490nm吸光度，校准曲线R²>0.99，动态范围0-2500U/L

IL-1β分泌检测：PE标记抗人IL-1β抗体，最低检出限5pg/mL

质膜完整性：7-AAD渗透性测试，浓度5μg/mL，排除死细胞干扰

细胞形态学参数：前向散射(FSC)/侧向散射(SSC)分析，粒径分辨率0.2-15μm

检测范围

抗肿瘤药物筛选：评估化疗药物诱导的免疫原性细胞死亡

病毒感染模型：流感病毒H1N1感染的巨噬细胞焦亡通路研究

神经退行性疾病：β淀粉样蛋白诱导的小胶质细胞焦亡监测

心血管支架材料：钴铬合金植入物生物相容性评估

纳米材料毒性：量子点(5-50nm)细胞摄取与焦亡关联性分析

自身免疫疾病：类风湿关节炎滑膜细胞焦亡特征谱

疫苗佐剂开发：铝盐佐剂激活NLRP3炎性体的动力学研究

转基因动物模型：Caspase-1基因敲除小鼠表型验证

器官移植排斥：供体淋巴细胞焦亡标志物追踪

环境污染物暴露：PM2.5颗粒物致肺上皮细胞焦亡评估

检测标准

ISO 10993-5:2009医疗器械细胞毒性体外评价方法

GB/T 16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分

ASTM F2315-18流式细胞术表征细胞表型标准指南

FDA Guidance for Industry: Immunogenicity Assessment 2020

ICH S6(R1)生物技术药物临床前安全性评价

GB/T 39730-2020细胞纯度检测通用要求

ISO 20391-1:2018细胞计数标准-第1部分实验设计

CLSI H42-A2流式细胞术免疫分型质量控制

GB/T 35823-2018干细胞检测通用要求

EMA/CHMP/ICH/731268/1998细胞凋亡检测方法验证指南

检测仪器

BD FACSymphony A5：配置5激光30参数检测，分辨率<75CV%，支持高维焦亡表型分析

Beckman CytoFLEX S：双前向角散射检测，粒径分辨率0.1μm，适用于原代小细胞检测

Miltenyi MACSQuant Analyzer 16：内置真空负压系统，样本流速12μL/min-1200μL/min梯度调节

Thermo Attune NxT：声波聚焦流体技术，流速1mL/min时检测精度CV<3%

Sony ID7000：配置棱镜分光系统，光谱覆盖350-920nm，支持40色焦亡多因子同步检测

Agilent NovoCyte Advanteon：双PMT前向散射检测，动态范围107，适配384孔板高通量筛选