细胞实验中的nc检测

检测项目

ncRNA序列测定：采用高通量测序技术解析序列结构，参数包括测序深度≥30x，错误率≤0.1%，覆盖度≥95%

ncRNA表达水平定量：通过qPCR方法精确量化表达量，参数如动态范围10^6，检测下限0.01 pg/μL，重复性CV≤5%

RNA完整性评估：检测RNA降解程度，参数使用RIN值≥7，28S/18S比值≥1.8，灵敏度达5 ng/μL

miRNA特异性检测：针对微小RNA的表达分析，参数包括检测特异性100%，交叉反应率≤0.01%，定量限1 copy/μL

lncRNA丰度测定：量化长非编码RNA表达，参数如线性范围10^4-10^8 copies，精确度误差±10%以内

circRNA鉴定分析：识别环形RNA结构，参数如阳性检出率≥99%，假阳性率≤0.05%，环化效率评估

RNA修饰检测：包括甲基化位点分析，参数如修饰位点覆盖率≥98%，修饰丰度分辨率0.1%

细胞功能关联验证：结合敲低或过表达实验，参数如敲低效率≥80%，相关性系数r>0.85，p值≤0.05

转录组全谱分析：全面检测表达谱，参数如基因检出数≥20000，差异表达阈值FC≥2，FDR≤0.05

选择性剪接事件检测：识别剪接变体，参数如剪接位点精度≥99%，变异频率检测限0.01%

ncRNA定位分析：通过原位杂交确定亚细胞分布，参数如空间分辨率0.1 μm，背景信号比≥10:1

稳定性测试：评估ncRNA半衰期，参数如降解速率恒定，时间分辨率1分钟，温度控制±0.5℃

检测范围

癌细胞系样本：如HeLa或A549细胞，用于肿瘤发生机制研究中的ncRNA调控分析

干细胞培养模型：包括胚胎干细胞或iPSCs，应用于分化过程ncRNA动态监测

组织切片样本：如小鼠肝脏或脑组织切片，支持器官特异性ncRNA表达图谱构建

体液生物标志物：如血清或尿液游离RNA，实现非侵入性疾病诊断ncRNA检测

细胞培养基残留：如DMEM或RPMI培养基，评估环境影响下的ncRNA稳定性

基因编辑细胞模型：CRISPR修饰细胞，用于功能缺失或增益实验中ncRNA关联验证

药物处理响应细胞：化疗剂暴露细胞，量化药物诱导的ncRNA表达变化

病毒感染宿主细胞：如HIV或流感病毒感染模型，探究病原ncRNA交互机制

老化细胞模型：复制老化或氧化应激细胞，检测衰老相关ncRNA标志物

3D类器官培养：肠或脑类器官，模拟体内微环境中ncRNA空间表达调控

微生物共培养系统：如肠道菌群与宿主细胞共培养，分析共生ncRNA信号通路

免疫细胞激活样本：T细胞或巨噬细胞，研究炎症反应中ncRNA调控网络

检测标准

GB/T 37871-2019 分子生物学检测通用要求：规范RNA提取和纯化步骤

ISO 20395:2019 生物技术核酸定量方法：设定qPCR检测精度和校准标准

ASTM E3130-18 高通量测序质量控制：定义序列数据准确性和重复性指标

GB/T 34796-2017 RNA完整性检测指南：规定RIN值和电泳评估参数

ISO 15189:2012 医学实验室质量要求：涵盖样本处理和数据验证流程

EN ISO 17025:2017 检测实验室能力标准：确保检测过程溯源性和一致性

GB/T 33250-2016 基因表达分析规范：制定差异表达统计方法和阈值

ISO/IEC 17043:2010 能力验证方案：用于实验室间ncRNA检测比对

ASTM E2883-13 原位杂交检测程序：标准化空间定位分析技术

GB/T 33526-2017 细胞功能实验指南：整合ncRNA与细胞行为关联验证

检测仪器

实时荧光定量PCR系统：基于TaqMan探针技术，功能为精确量化ncRNA表达水平，支持多通道检测

高通量测序平台：采用边合成边测序原理，功能实现全转录组ncRNA序列测定和大数据分析

毛细管电泳生物分析仪：通过微流控芯片，功能评估RNA完整性及大小分布，输出RIN值参数

激光共聚焦显微镜系统：集成荧光原位杂交模块，功能可视化ncRNA亚细胞定位，空间分辨率达纳米级

自动化核酸提取工作站：运用磁珠纯化技术，功能高效处理大批量样本，提取效率≥95%

流式细胞分选仪：结合荧光标记探针，功能分选特定细胞群体关联ncRNA表达，分选纯度≥98%

微阵列扫描分析系统：采用高密度芯片，功能高通量筛查ncRNA表达谱，检测灵敏度0.1 pg