耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测

检测项目

苯唑西林盐琼脂筛选：采用含4% NaCl的MHA培养基，6μg/ml苯唑西林浓度，35℃培养24小时判读结果

头孢西丁纸片扩散：依据CLSI标准，30μg头孢西丁纸片抑菌圈≤21mm为MRSA阳性

mecA基因PCR检测：扩增310bp特异性片段，引物序列mecA-F:5'-AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC-3'，mecA-R:5'-AGTTCTGCAGTACCGGATTTGC-3'

mecC基因检测：针对新型耐药基因，扩增片段138bp，退火温度56℃

PBP2a乳胶凝集：使用单克隆抗体检测青霉素结合蛋白2a，反应时间3分钟

VITEK 2 GP67药敏卡：自动化检测苯唑西林MIC值，临界浓度≥4μg/ml判为耐药

E试验：测定苯唑西林MIC梯度，范围0.016-256μg/ml

多重PCR分型：同时检测SCCmec I-V型，引物退火温度55±2℃

脉冲场凝胶电泳：使用SmaI酶切，电泳参数6V/cm，14℃，脉冲角度120°，时间5-40秒

spa基因分型：扩增X区可变序列，PCR产物测序比对Ridom数据库

MLST分型：扩增7个管家基因（arcC、aroE、glpF等），测序比对国际数据库

生物膜形成能力：96孔板结晶紫染色法，OD570nm>0.12判为阳性

环境耐受性测试：含0.5%氯己定培养基培养，存活率对比试验

溶血素表型：羊血琼脂5%CO2培养，观察β溶血环直径

检测范围

临床分离株：伤口分泌物、血液、痰液等标本分离的金黄色葡萄球菌

定植筛查样本：鼻腔拭子、咽拭子、腹股沟拭子等MRSA携带者筛查

手术器械生物膜：内镜腔道、骨科植入物表面生物负荷检测

ICU环境物表：呼吸机面板、监护仪按键等高接触表面采样

医用织物：手术衣、床单的ATP生物荧光检测及细菌培养

药品生产环境：无菌制剂灌装区沉降菌监测

食品加工设备：肉类加工传送带、冷藏库内壁拭子

畜牧养殖样本：猪鼻腔拭子、牛奶样品的MRSA监测

污水处理系统：生物滤膜表面微生物负载分析

个人防护用品：医用口罩过滤层、防护服材料抑菌性能

生物安全柜验证：工作台面消毒效果验证采样

消毒剂效力验证：苯扎氯铵、过氧化氢等消毒剂最低有效浓度测试

抗菌材料评估：含银敷料、抗菌涂层器械的抑菌圈试验

检测标准

CLSI M100-S33 抗菌药物敏感性试验执行标准

ISO 20776-1:2019 临床实验室药敏试验参考方法

WS/T 639-2018 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测规范

GB 15982-2012 医院消毒卫生标准

USP<71>无菌检查法

EUCAST 13.0版药敏试验折点标准

ISO 14698-1 洁净室生物污染控制

GB 4789.10-2016 食品安全国家标准 金黄色葡萄球菌检验

ASTM E3151-18 表面取样微生物回收率评估方法

YY/T 0688.1-2008 临床实验室检测方法验证要求

检测仪器

全自动微生物鉴定系统：VITEK 2 Compact采用荧光增强法，每15分钟读取GP67药敏卡孔位荧光信号

实时荧光定量PCR仪：ABI 7500配备TaqMan探针，检测mecA基因的FAM通道Ct值≤35判为阳性

基质辅助激光解吸飞行时间质谱：Bruker MALDI Biotyper通过m/z 2000-20000蛋白质指纹图谱匹配数据库

脉冲场凝胶电泳系统：CHEF-DR III型电泳槽，电压梯度6V/cm，脉冲角度120°，温度14℃恒控

全自动药敏分析仪：Phoenix M50通过比色法检测苯唑西林MIC值，浓度梯度0.5-8μg/ml

激光共聚焦显微镜：Leica TCS SP8观察生物膜三维结构，488nm激光激发SYTO9绿色荧光

微生物比浊仪：DensiCHEK Plus调整菌悬液浓度至0.5麦氏浊度，误差±0.01McF

恒温培养箱：Memmert IN75维持35±1℃培养温度，温度波动度≤0.3℃

生物安全柜：ESCO A2型，工作面风速0.50±0.05m/s，下降风速0.33m/s

全自动菌落计数仪：Interscience Scan 1200识别直径≥0.1mm菌落，计数误差<5%