植物抗病蛋白表达测试

检测项目

蛋白质浓度测定：采用Bradford法或BCA法检测总蛋白含量，检测范围0.1-2000μg/mL，精度±5%。

SDS-PAGE电泳：分离蛋白质分子量，使用12%凝胶，电压梯度100-200V，运行时间60分钟。

Western Blot分析：检测特定抗病蛋白表达，灵敏度0.1ng，采用PVDF膜转印，一抗稀释比例1:1000。

ELISA定量检测：双抗体夹心法测量目标蛋白水平，检测限5pg/mL，线性范围10-1000pg/mL。

免疫沉淀纯化：分离目标蛋白用于后续分析，结合效率>95%，离心转速12000g。

质谱蛋白质鉴定：鉴定蛋白序列及修饰，分辨率1Da，质量范围500-5000Da。

功能活性测定：评估抗病蛋白酶活性如β-1,3-葡聚糖酶，反应温度37℃，吸光度450nm读数。

RT-qPCR基因表达：关联基因表达水平，CT值计算差异，循环阈值设定40以内。

蛋白质稳定性测试：在不同温度（4-50℃）下评估变性率，时间点0-72小时。

翻译后修饰分析：磷酸化位点检测，使用特异性抗体，灵敏度10fmol。

亲和色谱分离：纯化目标蛋白，填料结合容量20mg/mL，流速1mL/min。

荧光标记检测：标记蛋白追踪表达动态，激发波长488nm，发射波长520nm。

细胞毒性评估：测试抗病蛋白对病原体抑制作用，抑制率计算精度±2%.

检测范围

转基因抗病作物：玉米和大豆等作物，评估外源基因表达稳定性与病害防控效果。

农作物叶片组织：常规样本类型，分析病害响应蛋白表达动态。

植物种子材料：筛选抗病品种，测试种子萌发期蛋白积累。

根系组织样本：针对土传病害，检测根特异性防御蛋白。

果实与花器官：评估采后病害抗性，如果实腐烂响应蛋白。

植物细胞培养物：体外模型测试蛋白表达效率。

生物农药产品：工程菌表达的抗病蛋白，评估田间应用效果。

育种筛选材料：用于杂交后代抗病性快速鉴定。

病害接种组织：病原体处理样本，分析蛋白诱导表达。

种子处理剂：抗病涂层材料，测试蛋白活性保留率。

观赏植物品种：玫瑰等，评估观赏价值相关抗病蛋白。

药用植物提取物：如人参，测试有效成分协同抗病表达。

饲料作物产品：苜蓿等，确保食品安全性蛋白水平。

检测标准

依据ISO 21572标准测定食品中蛋白质含量。

ISO 13903规范动植物饲料氨基酸分析方法。

GB/T 29994-2013植物蛋白免疫检测技术规程。

GB/T 19495-2004转基因生物环境安全检测方法。

ISO 9001质量管理体系在检测中应用。

GB/T 27404-2008实验室质量控制规范要求。

ISO 17025检测校准实验室能力通用要求。

GB/T 35875-2018植物病原菌检测技术指南。

ASTM E2694标准评估蛋白质稳定性协议。

GB/T 32958-2016蛋白质纯化工艺验证方法。

检测仪器

紫外可见分光光度计：测量蛋白质浓度，波长范围190-800nm，支持微量样本分析。

垂直电泳系统：执行SDS-PAGE分离，配备恒压电源100-300V。

半干转印装置：用于Western Blot蛋白转移，转印效率>90%。

多功能酶标仪：进行ELISA定量检测，支持96孔板，吸光度范围0-4 OD。

质谱分析仪：鉴定蛋白质序列，质量精度±0.1 Da。

实时荧光定量PCR仪：关联基因表达，温度控制精度±0.1℃。

高速离心机：样本制备，最大转速20000 rpm，容量50mL。

恒温培养箱：功能活性测定，温度范围4-60℃，均匀度±1℃。

凝胶成像系统：分析电泳结果，分辨率500万像素，支持荧光检测。

液相色谱仪：纯化蛋白质，流速范围0.1-10mL/min，柱温控制30-80℃。