植物抗病蛋白定性测试

检测项目

蛋白质分子量测定：采用SDS-PAGE电泳分离，检测范围10-250kDa，分辨率达0.5kDa

特异性抗体结合检测：基于抗原-抗体反应，使用单克隆抗体验证R基因产物结合位点

等电点分析：通过双向电泳测定，pH梯度范围3-10，精度±0.05pH单位

糖基化修饰鉴定：凝集素印迹法检测N-连接糖基化，灵敏度0.1μg蛋白

磷酸化位点定位：质谱法测定丝氨酸/苏氨酸磷酸化，检出限0.01pmol

蛋白二聚化验证：非还原性电泳检测二硫键结合状态，迁移率偏差≤5%

核定位信号验证：细胞核分离结合Western blotting，核蛋白纯度≥95%

病原诱导表达动力学：时间分辨ELISA检测，时间梯度0-72h，采样间隔2h

热稳定性测试：差示扫描量热法测定变性温度，温控精度±0.1℃

膜结合能力分析：超速离心分离膜蛋白，离心力100,000×g，保留率≥90%

锌指结构域鉴定：原子吸收光谱测定锌离子结合量，检测限0.1μg/g

亮氨酸拉链验证：圆二色谱扫描190-250nm，α-螺旋含量计算误差≤2%

检测范围

粮食作物抗病蛋白：水稻Xa21蛋白、小麦Yr抗锈病蛋白等抗真菌病害检测

经济作物抗病毒蛋白：烟草N蛋白、番茄Sw-5b蛋白等病毒外壳蛋白结合能力验证

模式植物信号蛋白：拟南芥FLS2受体、RPS4抗病信号传导因子磷酸化检测

转基因抗病材料：外源表达几丁质酶、葡聚糖酶等病原相关分子模式识别蛋白

林木抗逆蛋白：杨树PtDef防御素、松树PmPR10病程相关蛋白表达定位

药用植物防御蛋白：紫杉醇合成途径关键酶、黄芪几丁质结合蛋白构象分析

园艺作物抗虫蛋白：茄科植物胰蛋白酶抑制剂活性、十字花科凝集素糖基化修饰

藻类抗病物质：螺旋藻藻蓝蛋白寡聚化状态、小球藻抗病毒肽分子量测定

植物疫苗制剂：重组表达激发子蛋白纯度检测，杂质含量≤0.5%

种子处理剂：包衣抗菌肽稳定性测试，25℃储存期活性维持≥180天

离体培养材料：组培苗抗病蛋白诱导表达动力学监测

检测标准

ISO 21571:2005 植物源产品蛋白质分析方法通则

GB/T 19495.6-2004 转基因植物检测 蛋白质检测方法

AOAC Official Method 999.03 植物蛋白免疫印迹定性规程

ISO 21572:2019 食品中蛋白质免疫化学方法验证规范

GB/T 38165-2019 植物病理检测术语与诊断规程

ASTM E3066-2016 植物源抗体结合检测标准指南

UPOV TG/1/3 植物新品种抗病性测试分子标记辅助规程

EP 7.0 2.2.44 毛细管电泳法测定蛋白纯度

FDA BAM Chapter 5g 植物源免疫检测质量控制要求

GB 5009.256-2016 植物源性食品中特定蛋白测定

检测仪器

垂直电泳系统：预制胶槽支持26×20cm凝胶，恒流范围1-100mA，完成SDS-PAGE蛋白分离

化学发光成像仪：16位深度CCD传感器，检测限0.1pg蛋白，获取Western blotting信号

圆二色谱仪：氙灯光源波长范围170-900nm，扫描速度500nm/min，解析蛋白二级结构

微量紫外分光光度计：样品体积0.5μL，280nm吸光度检测范围0.02-300Abs，测定蛋白浓度

激光共聚焦显微镜：405/488/561/640nm四激光器，100×油镜NA1.4，实现亚细胞定位

实时荧光酶标仪：温度控制范围4-45℃，振荡强度0-7级，完成时间分辨ELISA检测

纳米电喷雾质谱仪：质量精度1ppm，分辨率70,000FWHM，鉴定磷酸化修饰位点

差示扫描量热仪：温控范围-10℃至130℃，升温速率0.1-5℃/min，评估蛋白热稳定性

超速离心机：最大转速150,000rpm，真空度0.01Pa，分离膜结合蛋白质复合体

蛋白质纯化系统：流速范围0.01-10mL/min，压力上限20MPa，制备检测级蛋白样品