分子排阻色谱法杂质分析

检测项目

高分子聚集体的定量分析：测定蛋白质或多肽药物中二聚体、寡聚体及更高阶聚集体的含量，评估产品稳定性。

蛋白片段与降解产物分析：分离并定量因化学降解或酶解产生的分子量较小的蛋白片段杂质。

抗体药物偶联物（ADC）的DAR分布：分析ADC药物中不同药物抗体比（DAR）组分的分布情况。

聚合物分子量分布（MWD）：测定合成聚合物或天然多糖的分子量分布及其多分散性指数（PDI）。

宿主细胞蛋白（HCP）残留：在某些特定条件下，用于评估与产品分子量差异较大的HCP杂质。

病毒载体空壳率分析：用于基因治疗中，分离并定量腺相关病毒（AAV）等载体中的空壳与完整病毒颗粒。

脂质体粒径与聚集分析：基于尺寸排阻原理，评估脂质体制剂的粒径分布及是否存在聚集体。

多糖疫苗的纯度分析：分离纯化多糖抗原，并分析其降解产物或聚合度分布。

共轭物中未结合小分子的检测：检测如PEG化蛋白中未反应的游离PEG等小分子杂质。

包涵体复性过程中的中间体监控：在蛋白质复性工艺中，监控不同聚集状态中间体的变化。

检测范围

单克隆抗体及其衍生物：涵盖IgG、IgM等多种抗体形式，分析其聚集体、片段等关键质量属性。

重组治疗性蛋白：包括细胞因子、激素、酶等多种蛋白药物的杂质谱分析。

疫苗类生物制品：适用于病毒样颗粒（VLP）、多糖蛋白结合疫苗等的大分子杂质检测。

基因治疗载体：适用于腺病毒、慢病毒、AAV等病毒载体的空壳/完整颗粒分析。

合成聚合物：如聚乙二醇（PEG）、聚乙烯醇（PVA）、聚苯乙烯等合成高分子的表征。

天然多糖与寡糖：包括透明质酸、肝素、壳聚糖等生物来源多糖的纯度与分子量分析。

核酸类药物：用于质粒DNA、mRNA、 siRNA等的大片段聚合体或降解产物分析。

肽类药物：分析多肽合成中产生的缺失序列肽或聚合肽等杂质。

脂质纳米颗粒（LNP）：评估LNP的组装效率、粒径分布及聚集状态。

血液制品与血浆蛋白：如人血清白蛋白、免疫球蛋白制剂中的多聚体含量测定。

检测方法

等度洗脱法：使用恒定组成的流动相进行洗脱，是最常用、最稳定的标准分析方法。

多角度激光光散射联用法（SEC-MALS）：联用MALS检测器，无需标准品即可直接测定绝对分子量与粒径。

示差折光/紫外联用法（SEC-RI/UV）：结合RI和UV双检测器，提高检测灵敏度与通用性，适用于无紫外吸收的样品。

动态光散射联用法（SEC-DLS）：在线DLS提供流体力学半径信息，辅助峰鉴定与构象分析。

粘度检测器联用法（SEC-Viscometry）：联用粘度计，用于研究高分子链的结构、支化度等信息。

荧光检测法：采用荧光检测器，对具有天然荧光或经荧光标记的样品进行高选择性、高灵敏度分析。

电喷雾电离质谱联用法（SEC-ESI-MS）：提供精确的分子量信息，用于复杂混合物中各组分的鉴定。

电感耦合等离子体质谱联用法（SEC-ICP-MS）：用于检测金属蛋白或含金属杂质，实现元素特异性检测。

静态进样与自动进样法：根据通量要求选择手动静态进样或高精度自动进样器进样。

方法验证与系统适用性试验：包括柱效、分辨率、拖尾因子、重复性等测试，确保方法符合法规要求。

检测仪器设备

高效液相色谱（HPLC）系统：提供稳定的输液能力，是SEC分析的核心泵送单元。

分子排阻色谱柱：基于不同孔径的硅胶或聚合物填料，是实现尺寸分离的关键部件。

紫外-可见光（UV-Vis）检测器：最常用的检测器，适用于具有紫外吸收的发色团样品。

示差折光（RI）检测器：通用型检测器，通过测量溶液折射率变化来检测几乎所有溶质。

多角度激光光散射（MALS）检测器: 用于直接测定绝对分子量、均方根半径及聚集状态的高级检测器。

动态光散射（DLS）检测器: 作为在线检测器，提供流体力学半径的实时信息。

自动进样器: 实现高通量、高重复性的样品自动引入，减少人为误差。

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