本检测详细阐述了血清代谢标志物固相萃取测试这一前沿分析技术。本检测系统介绍了该技术的核心检测项目、广泛的检测范围、标准化的检测方法流程以及所需的关键仪器设备。通过固相萃取技术对复杂血清样本进行高效前处理,结合现代分析仪器,实现对内源性小分子代谢物的精准定性与定量分析,为疾病诊断、生物标志物发现及代谢组学研究提供可靠的技术支撑。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
氨基酸谱分析:定量检测血清中20余种关键氨基酸及其衍生物,评估蛋白质代谢与合成状态。
脂肪酸谱分析:测定短链、中链及长链游离脂肪酸水平,反映能量代谢与脂质代谢状况。
有机酸代谢物:检测三羧酸循环中间产物、酮体等,直接指示细胞能量代谢通路功能。
胆汁酸谱:分析初级与次级胆汁酸组成及比例,用于评估肝脏功能与肠道菌群代谢。
肉碱及酰基肉碱谱:监测脂肪酸β-氧化过程的关键代谢物,是先天性代谢缺陷的重要筛查指标。
甾体激素:定量皮质醇、性激素等甾体类激素,用于内分泌功能与相关疾病研究。
维生素与辅酶:检测水溶性及脂溶性维生素水平,评估机体微量营养素状态。
神经递质及其代谢物:分析多巴胺、5-羟色胺等神经活性物质,关联神经系统功能与疾病。
嘌呤与嘧啶代谢物:监测尿酸、次黄嘌呤等物质,反映核酸代谢与细胞更新状态。
氧化应激标志物:测定谷胱甘肽、丙二醛等,评估机体氧化还原平衡与自由基损伤程度。
检测范围
先天性代谢缺陷病筛查:覆盖氨基酸、有机酸、脂肪酸氧化等多种遗传性代谢疾病的生物标志物。
肿瘤代谢重编程研究:检测与瓦博格效应相关的乳酸、谷氨酰胺等代谢物变化。
心血管疾病风险评估:分析同型半胱氨酸、氧化三甲胺等与心脑血管疾病密切相关的代谢物。
糖尿病及并发症监测:涵盖糖酵解、多元醇通路等异常代谢产物,如晚期糖基化终末产物。
肝脏功能与损伤评估:针对胆红素代谢、氨解毒通路以及肝细胞损伤释放的特定代谢物。
肾脏功能评价:检测肌酐、尿素氮及尿毒症毒素等经肾脏排泄或蓄积的代谢废物。
神经系统疾病研究:包括阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性病变相关的特征性代谢谱。
营养与膳食干预评估:监测特定营养素摄入后的血清代谢应答,进行个性化营养评价。
药物代谢动力学研究:追踪药物原型及其在体内的I相、II相代谢产物浓度变化。
衰老与长寿机制探索:分析与衰老进程相关的代谢通路变化,如NAD+水平、线粒体功能标志物。
检测方法
样本采集与预处理:规范空腹静脉采血,离心分离血清,并立即于-80℃保存以防止代谢物降解。
蛋白质沉淀强>:使用甲醇、乙腈或高氯酸去除血清中高丰度蛋白质,减少基质干扰。
<强>固相萃取柱选择强>:根据目标物极性(亲水/疏水)和性质(酸性/碱性/两性)选择反相C18、混合模式或亲水相互作用柱。
<强>固相萃取活化与平衡强>:依次用有机溶剂(如甲醇)和水溶液活化并平衡萃取柱,确保填料充分润湿和适宜的结合环境。
<强>样本上样与吸附强>:将处理后的血清上清液以恒定流速通过SPE柱,使目标代谢物选择性吸附在填料上。
<强>淋洗去除杂质强>:使用弱洗脱溶剂(如水或低比例有机溶剂-水溶液)洗去弱保留的干扰物质。
<强>目标物洗脱强>:采用强洗脱溶剂(如高比例甲醇/乙腈,或特定pH的缓冲液)将目标代谢物从柱上洗脱并收集。
<强>洗脱液浓缩与复溶强>:利用氮吹仪或真空离心浓缩仪将洗脱液挥干,再用适合仪器分析的流动相复溶。
<强>仪器分析与数据采集强>:将最终样品注入液相色谱-质谱联用仪等设备进行分析,获得原始色谱图与质谱数据。
<强>数据处理与统计分析强>:使用专业软件进行峰提取、对齐、鉴定和定量,并采用多元统计方法挖掘差异代谢物。
检测仪器设备
<强>高效液相色谱仪强>:实现复杂血清提取物中代谢物的高分辨率分离,是串联质谱的前端分离核心设备。
<强>三重四极杆质谱仪强>:具备高灵敏度与特异性,通过多反应监测模式对目标代谢物进行精准定量分析。
<强>高分辨率质谱仪强>:如Q-TOF或Orbitrap,用于非靶向代谢组学筛查,提供精确分子量以鉴定未知代谢物。
<强>固相萃取装置强>:包括真空 manifold 或正压萃取系统,用于批量样本的自动化或半自动化SPE处理。
<强>氮吹浓缩仪强>:利用高纯度氮气快速温和地吹干样品溶液,实现代谢物的无损浓缩。
<强>高速冷冻离心机强>:用于快速分离血清及完成蛋白质沉淀步骤,确保样本处理效率与一致性。
<强>-80℃超低温冰箱强>:长期稳定保存血清样本及不稳定代谢物标准品,防止生物活性丧失。
<强>精密移液器与天平强>:确保样本量取、试剂添加和标准品称量的高度准确性,是定量分析的基础。
<强>超声波清洗机/细胞破碎仪强>:辅助难溶代谢物的提取或使样本均质化,提高提取效率。
<强>pH计与涡旋混合器强>: 精确调节萃取或复溶溶剂的pH值,并通过涡旋确保样品充分混匀与反应完全。
