本检测系统介绍了蛋白质电泳分析这一核心生物技术。文章详细阐述了该技术的四大核心模块:检测项目、检测范围、检测方法与检测仪器设备。每个模块均列举了十个关键条目,涵盖从基础蛋白分离到复杂翻译后修饰分析等广泛内容,旨在为生命科学研究和临床诊断领域的从业者提供一份全面、结构化的技术参考。

核心优势

检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。

检测流程

1 需求沟通
2 方案定制
3 取样/送检
4 实验检测
5 数据分析
6 出具报告

检测项目

总蛋白浓度测定:通过电泳前染色或与已知标准品对比,对样品中的总蛋白质含量进行半定量或相对定量分析。

蛋白质纯度评估:检测样品中是否含有非目标蛋白或其他杂质,是蛋白质纯化过程中的关键质控步骤。

分子量测定:通过与已知分子量的标准蛋白(Marker)在凝胶中的迁移位置进行比较,估算目标蛋白的近似分子量。

亚基组成分析:用于确定蛋白质复合物由几个亚基构成,以及各亚基的分子量大小和比例。

蛋白质表达差异分析:比较不同样本(如正常与病变组织)间特定蛋白的表达量高低,常用于生物标志物筛选。

免疫印迹(Western Blot)前处理:作为Western Blot的第一步,将复杂样品中的蛋白质按分子量分离,以便后续的特异性抗体检测。

翻译后修饰初步筛查:通过条带迁移率的异常变化(如磷酸化导致条带弥散或位移)初步判断蛋白质是否存在翻译后修饰。

蛋白质相互作用验证:结合免疫共沉淀等技术,验证蛋白质间的相互作用,如检测共沉淀复合物中的组分。

多克隆抗体血清效价检测:通过免疫印迹分析免疫动物血清,评估其中特异性抗体的产生情况及效价。

蛋白质降解产物分析:检测蛋白质样品在储存或处理过程中是否发生降解,表现为在低分子量区域出现额外条带。

检测范围

细胞裂解液:来自动物、植物或微生物细胞的整体蛋白质提取物,用于全蛋白组分析或目标蛋白检测。

组织匀浆液:从各种生物组织中制备的蛋白质样品,用于病理研究、组织特异性表达分析。

血清/血浆样本:临床常见的检测样本,用于寻找疾病相关的生物标志物或进行免疫球蛋白分析。

重组蛋白样品:通过基因工程表达并纯化的蛋白质,用于鉴定其纯度、分子量及表达水平。

蛋白质纯化组分:层析、沉淀等纯化步骤中收集的各流分,用于监控纯化效率和目标蛋白的分布。

免疫沉淀产物:利用特异性抗体从复杂混合物中富集得到的抗原及其互作蛋白复合物。

细胞器分离组分:如线粒体、细胞核、微粒体等细胞器提取物,用于蛋白质的亚细胞定位研究。

分泌蛋白样品:如细胞培养上清液、乳汁、唾液等体液中的可溶性蛋白质。

膜蛋白提取物:经过特殊去垢剂处理获得的膜结合蛋白,用于研究跨膜蛋白和膜相关蛋白。

植物蛋白提取液:来自不同植物组织,可能含有酚类、多糖等干扰物质的特殊蛋白质样品。

检测方法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):最常用的方法,在变性剂SDS存在下,蛋白质按分子量大小分离,用于分子量测定和纯度分析。

天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE):在非变性条件下进行,保持蛋白质的天然构象和生物活性,用于分析天然状态下的蛋白质复合物。

等电聚焦电泳(IEF):根据蛋白质的等电点(pI)进行分离,是双向电泳的第一向,也是分析蛋白质电荷异质性的主要方法。

双向电泳(2-DE):结合IEF(第一向,按pI分离)和SDS-PAGE(第二向,按分子量分离),能极大提高复杂样品的分辨率。

琼脂糖凝胶电泳:主要用于分离大分子量蛋白质复合物、脂蛋白或DNA-蛋白质复合物,孔径较大。

梯度凝胶电泳:使用浓度梯度凝胶(如4-20%),能在同一块胶上获得更宽的分子量分离范围,分辨率更高。

考马斯亮蓝染色法:最常用的通用型染色方法,操作简便,成本低,灵敏度约为100ng。

银染法:灵敏度极高的染色方法(可达1ng),用于检测微量蛋白质,但步骤繁琐且线性范围窄。

荧光染色法:使用SYPRO Ruby等荧光染料,灵敏度高,线性范围宽,且与后续质谱分析兼容性好。

免疫印迹法(Western Blot):将电泳分离的蛋白质转移到膜上,再用特异性抗体进行检测,兼具分离和特异性识别功能。

检测仪器设备

垂直板电泳槽:进行SDS-PAGE、Native-PAGE等聚丙烯酰胺凝胶电泳的核心装置,提供电场环境。

水平电泳槽:主要用于琼脂糖凝胶电泳和等电聚焦电泳(IEF)。

电源:提供稳定或可编程的直流电压、电流和功率,是驱动电泳过程的关键设备。

凝胶成像系统:由暗箱、CCD相机和专业软件组成,用于采集和分析染色后凝胶或印迹膜的图像。

化学发光成像仪:专门用于检测Western Blot中化学发光信号的成像设备,具有极高的灵敏度。

凝胶灌制模具及制胶器:用于手动或半自动灌制不同厚度和尺寸的聚丙烯酰胺凝胶。

半干式转印仪: 将凝胶中的蛋白质快速、高效地转印至PVDF或NC膜上,用于Western Blot。

湿式转印槽: 另一种经典的转印装置,适用于大分子量蛋白或需要长时间转印的情况。

扫描光密度仪: 对染色后的凝胶或X光片进行扫描和光密度分析,对条带进行定量比较。

双向电泳系统: 一套集成设备,通常包括等电聚焦仪、第二向垂直电泳槽及配套的灌胶模具和试剂。

需要蛋白质电泳分析服务?

立即咨询