本检测详细介绍了电泳分子量测试这一核心生物技术。文章系统阐述了该技术的检测项目、适用范围、常用方法及关键仪器设备,旨在为科研人员和实验室技术人员提供一份全面、实用的操作指南与原理参考。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
蛋白质分子量测定:通过标准分子量蛋白Marker对比,精确测定目标蛋白质的表观分子量。
抗体纯度分析:评估单克隆或多克隆抗体样品中目标条带的纯度及是否存在降解片段。
酶切产物分析:对经限制性内切酶或蛋白酶处理后的DNA/蛋白片段进行大小分离与鉴定。
多肽分子量确认:验证合成或纯化多肽的分子量是否符合理论设计值。
蛋白复合物组分分析:在变性条件下分析复合物中各亚基的分子量大小。
蛋白质翻译后修饰检测:通过分子量偏移初步判断磷酸化、糖基化等修饰的存在。
核酸片段大小分析:测定DNA/RNA片段、PCR产物或寡核苷酸的精确长度。
蛋白表达验证:确认重组蛋白在宿主细胞中是否成功表达及表达产物的大小。
杂质与降解产物检测:识别样品中是否存在高分子量聚集物或低分子量降解条带。
批次间一致性对比:通过平行电泳比较不同批次生产样品的分子量分布是否一致。
检测范围
小分子多肽:适用于分子量在1 kDa至20 kDa之间的短肽链分析。
常规蛋白质:覆盖大多数功能蛋白和结构蛋白,范围通常在10 kDa至250 kDa。
大分子量蛋白:可检测高达500 kDa甚至更大的蛋白质复合物或纤维蛋白。
DNA限制性片段:分析范围从几十bp到数万bp的线性DNA片段。
RNA转录本:用于分离和评估不同大小的mRNA、rRNA等,范围通常为0.1 kb至10 kb。
PCR产物:验证100 bp至3000 bp范围内的扩增产物大小是否正确。
抗体轻链与重链:分别分析约25 kDa的轻链和50-75 kDa的重链分子量。
病毒蛋白:用于分析病毒外壳蛋白、核心蛋白等组分的分子量。
膜蛋白:在添加适当去垢剂的条件下,可对膜蛋白进行分子量估算。
蛋白质标记物:标准蛋白Marker本身也需通过此法进行精确标定和质量控制。
检测方法
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):最常用的变性电泳方法,基于蛋白质的分子量进行分离。
Native-PAGE(非变性电泳):在非变性条件下分离蛋白质,保持其天然构象和活性。
Tris-甘氨酸系统:经典的SDS-PAGE缓冲系统,适用于大多数蛋白质的分离。
Tris-硼酸-EDTA缓冲系统(TBE):常用于核酸电泳,稳定性好,分辨率高。
Tris-乙酸-EDTA缓冲系统(TAE):另一种常用的核酸电泳缓冲液,适用于大片段DNA回收。
梯度凝胶电泳:使用浓度梯度凝胶,可扩大分离范围并提高特定区间的分辨率。
二硫键还原与非还原电泳:通过添加或不加β-巯基乙醇/DTT,分析二硫键连接情况。
Western Blotting(免疫印迹):电泳后转膜,利用特异性抗体鉴定目标蛋白的分子量。
琼脂糖凝胶电泳:主要用于核酸片段的分析和分子量测定。
毛细管电泳(CE-SDS):自动化、定量化的高精度方法,常用于生物制药行业。
检测仪器设备
垂直板电泳槽:用于进行SDS-PAGE或Native-PAGE的核心装置,提供电场环境。
水平电泳槽:主要用于琼脂糖凝胶电泳,进行核酸样品的分离。
高压电源:为电泳过程提供稳定、可调的直流电压和电流。
凝胶成像系统:配备CCD相机和特定光源,用于拍摄并分析染色后的凝胶图像。
化学发光成像仪:专门用于检测Western Blotting的化学发光信号,灵敏度极高。
凝胶灌制模具及梳子:用于制备具有均匀厚度和规整上样孔的聚丙烯酰胺凝胶。
微量进样器/上样枪:确保将微量样品(通常1-20 μL)精确加入上样孔中。
恒温循环水浴或加热块:用于样品变性前的加热处理,确保蛋白质充分解聚和结合SDS。
摇床:用于电泳后的凝胶染色、脱色及膜的封闭、洗涤等步骤。
毛细管电泳仪:集成自动进样、分离、检测功能的高端设备,用于CE-SDS分析。
